总RNA/mRNA m6A/ac4C定量检测(Dot Blot法) 在斑点杂交中,要检测到的生物分子不是首先通过电泳分离出来的,相反,将含有被检测分子的混合物直接点在膜上,烘烤固定。然后与m6A或Ac4C抗体(Western blot)杂交后检测,步骤如下: (1)交联:在65℃下5分钟,使mRNA变性以破坏RNA中的二级结构。变性后立即在冰上冷却,以防止...
m6A单碱基分辨率交联和免疫沉淀方法(m6A-CLIP/miCLIP)可以成功生成单碱基分辨率的m6A位点信息。该方法片段化的RNA与m6A抗体孵育,然后RNA-抗体复合物通过254 nm UV光交联,通过蛋白酶消化得到的氨基酸残基抑制逆转录中的碱基配对,导致在m6A位点附近发生片段化或突变,最终以单碱基分辨率获得m6A位点信息(图1A)。抗体和RNA的...
m6A单碱基分辨率交联和免疫沉淀方法(m6A-CLIP/miCLIP)可以成功生成单碱基分辨率的m6A位点信息。该方法片段化的RNA与m6A抗体孵育,然后RNA-抗体复合物通过254 nm UV光交联,通过蛋白酶消化得到的氨基酸残基抑制逆转录中的碱基配对,导致在m6A位点附近发生片段化或突变,最终以单碱基分辨率获得m6A位点信息(图1A)。抗体和RNA的...
RNA/mRNA m6A定量检测(Dot Blot)RNA提取与质检、变性与交联、封闭、抗体孵育、显色、定量分析2~3周 客户提供 提供样本 Total RNA样本 细胞样本 组织样本 具体样本要求请详见《RNA甲基化(m6A)检测服务订购表》中附件:《送样要求》。 提供信息 物种信息,单基因检测提供目的基因 ...
在这个过程中,m6A首先干扰上游引物的延伸,然后阻碍下游引物的连接。尽管m6A不会100%抑制每一步,但通过两步反应可以大幅减少最终产物量。最终,通过qRT-PCR分析目标位点和对照组的阈值循环(Ct)的差异,可以检测目标位点的m6A修饰和甲基化程度(图2)。SELECT操作简便,所有实验都可以在一个反应系统中完成,无需额外的纯化...
在这个过程中,m6A首先干扰上游引物的延伸,然后阻碍下游引物的连接。尽管m6A不会100%抑制每一步,但通过两步反应可以大幅减少最终产物量。最终,通过qRT-PCR分析目标位点和对照组的阈值循环(Ct)的差异,可以检测目标位点的m6A修饰和甲基化程度(图2)。SELECT操作简便,所有实验都可以在一个反应系统中完成,无需额外的纯化...
N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine, m6A)是真核生物mRNA中的化学修饰,在基因表达调控中发挥着重要作用,包括转录调控和转录后调控。m6A是一种可逆修饰,分别由甲基转移酶(writer)、去甲基化酶(eraser)和m6A结合蛋白(reader)进行添加、去除和识别。 m6A检测技术的发展是研究m6A功能的基础。薄层色谱(TLC)、斑点印迹(dot-b...
首先通过经典的m6A实验“dot blot”,发现缺氧能导致CMECs细胞整体m6A水平的减弱,从一堆m6A相关基因中,作者找到了关键因子ALKBH5,并发现其异常表达影响内皮细胞的血管生成能力。 然后,作者通过MeRIP-seq找到ALKBH5潜在的靶基因WNT5A,并发现ALKBH5通过去除转录后的m6A修饰,降低WNT5A mRNA的稳定性。
SELECT操作简便，所有实验都可以在一个反应系统中完成，无需额外的纯化步骤。但SELECT需要引入对照组并生成...
在这个过程中,m6A首先干扰上游引物的延伸,然后阻碍下游引物的连接。尽管m6A不会100%抑制每一步,但通过两步反应可以大幅减少最终产物量。最终,通过qRT-PCR分析目标位点和对照组的阈值循环(Ct)的差异,可以检测目标位点的m6A修饰和甲基化程度(图2)。SELECT操作简便,所有实验都可以在一个反应系统中完成,无需额外的纯化...