所以在fig1c中,作者通过m6A dot blot assay验证了m6A在各乳腺癌中的水平,发现MCF7和SKBR3中表达最高。然后,通过shRNA构建LNC942敲低的细胞系(fig1d)。 接上图,作者发现敲降LNC942后,能够显著降低METTL14这个m6A writer复合物中的组成之一的表达(fig1e)。在组织水平,通过ISH, IHC, qPCR,验证了LNC942,m6A,M...
另外,m6A dot blot assay实验验证了LNC942沉默能够降低细胞整体的m6A水平(fig2g)。其实我们可以看到,作者只是比较基础地验证了LNC942能够维持METTL14的稳定性,但是对于中间的具体的机制是怎么样的,可能由于只是一条旁支的非核心机制路线,并没有作深入的探讨。结合我们之前推送的lncRNA与RBP来看,LNC942很可能也是通过...
随后利用dot blot法检测整体m6A甲基化水平，结果揭示黑色素瘤细胞中的m6A甲基化水平低于正常黑色素细胞，...
体外甲基转移实验(vitro methyl transfer assay)、斑点印迹杂交(dot blot)、LC-MS/MS和m6A-seq结果表明MdMTA是一个m6A甲基转移酶(writers),对m6A mRNA修饰至关重要。 进一步研究表明,MdMTA参与苹果抗旱性。干旱条件下的m6A-seq和RNA-seq分析结果表明,MdMTA介导m6A修饰和参与氧化应激和木质素沉积的mRNA转录。此外,m6...
研究人员鉴定了m6A甲基转移酶复合物的一个催化活性组分MdMTA。体外甲基转移实验(vitro methyl transfer assay)、斑点印迹杂交(dot blot)、LC-MS/MS和m6A-seq结果表明MdMTA是一个m6A甲基转移酶(writers),对m6A mRNA修饰至关重要。 进一步研究表明,MdMTA参与苹果抗旱性。干旱条件下的m6A-seq和RNA-seq分析结果表明,Md...
研究人员鉴定了m6A甲基转移酶复合物的一个催化活性组分MdMTA。体外甲基转移实验(vitro methyl transfer assay)、斑点印迹杂交(dot blot)、LC-MS/MS和m6A-seq结果表明MdMTA是一个m6A甲基转移酶(writers),对m6A mRNA修饰至关重要。 进一步研究表明,MdMTA参与苹果抗旱性。干旱条件下的m6A-seq和RNA-seq分析结果表明,Md...
研究人员鉴定了m6A甲基转移酶复合物的一个催化活性组分MdMTA。体外甲基转移实验(vitro methyl transfer assay)、斑点印迹杂交(dot blot)、LC-MS/MS和m6A-seq结果表明MdMTA是一个m6A甲基转移酶(writers),对m6A mRNA修饰至关重要。 进一步研究表明,MdMTA参与苹果抗旱性。干旱条件下的m6A-seq和RNA-seq分析结果表明,Md...
总RNA/mRNA m6A/ac4C定量检测(Dot Blot法) 在斑点杂交中,要检测到的生物分子不是首先通过电泳分离出来的,相反,将含有被检测分子的混合物直接点在膜上,烘烤固定。然后与m6A或Ac4C抗体(Western blot)杂交后检测,步骤如下: (1)交联:在65℃下5分钟,使mRNA变性以破坏RNA中的二级结构。变性后立即在冰上冷却,以防止...
研究人员鉴定了m6A甲基转移酶复合物的一个催化活性组分MdMTA。体外甲基转移实验(vitro methyl transfer assay)、斑点印迹杂交(dot blot)、LC-MS/MS和m6A-seq结果表明MdMTA是一个m6A甲基转移酶(writers),对m6A mRNA修饰至关重要。 进一步研究表明,MdMTA参与苹果抗旱性。干旱条件下的m6A-seq和RNA-seq分析结果表明,Md...
首先利用MeRIP-seq测序数据结合m6A位点预测网站初步判断m6A修饰位点可能位于PxJHE的3′-UTR区靠近终止密码子附近,后续利用m6A-IP-qPCR技术确定了此m6A位点的真实性。利用双荧光素酶报告实验(Dual-luciferase reporter assays)和mRNA稳定性实验(mRNA stability assay)证明了此m6A位点负调控PxJHE基因表达。并且PxMettl3和Px...