在fig2f中,通过加入转录抑制剂处理细胞,发现细胞内残留的METTL14随时间减少(降解),而沉默LNC942能够加速mRNA降解的速度。另外,m6A dot blot assay实验验证了LNC942沉默能够降低细胞整体的m6A水平(fig2G)。其实我们可以看到,作者只是比较基础地验证了LNC942能够维持METTL14的稳定性,但是对于中间的具体的机制是怎么样的,...
m6A-REF-Seq: 一种用于检测m6A位点的高通量方法。 lMeRIP-qPCR,m6A dot blot assay ØMeRIP-qPCR:这是一种结合了甲基化RNA免疫沉淀(MeRIP)和定量PCR(qPCR)的技术,用于验证目标基因上特定修饰位点的修饰水平。通过比较免疫沉淀样品(IP)和未处理样品(Input)之间的qPCR信号,可以得到修饰水平的百分比,从而评估m6A修饰...
m6A-REF-Seq: 一种用于检测m6A位点的高通量方法。 l MeRIP-qPCR,m6A dot blot assay Ø MeRIP-qPCR:这是一种结合了甲基化RNA免疫沉淀(MeRIP)和定量PCR(qPCR)的技术,用于验证目标基因上特定修饰位点的修饰水平。通过比较免疫沉淀样品(IP)和未处理样品(Input)之间的qPCR信号,可以得到修饰水平的百分比,从而评估m6A...
(H) METTL14敲低组和对照组中眼黑色素瘤细胞(92.1和CRMM1)在DMSO或LBH589暴露后,METTL14相对于GAPDH的Western blot。 (I) METTL14敲低组或对照组中进行细胞聚落形成分析(colony-formation assay)以评估DMSO或LBH589处理后眼部黑色素瘤细胞(92.1和CRMM1)的生长。 (J) 在METTL14敲低组或对照组中,分别进行transw...
(H) METTL14敲低组和对照组中眼黑色素瘤细胞(92.1和CRMM1)在DMSO或LBH589暴露后,METTL14相对于GAPDH的Western blot。 (I) METTL14敲低组或对照组中进行细胞聚落形成分析(colony-formation assay)以评估DMSO或LBH589处理后眼部黑色素瘤细胞(92.1和CRMM1)的生长。
(4)m6A dot blot assay进一步证实了CRC中的m6A修饰水平明显更高,同时,6个CRC细胞系(HT29、LoVo、DLD-1、SW480、SW620和HCT116)中,NCM460、METTL3的mRNA和蛋白水平均显著上调,这与CRC组织中的结果一致; (5)HCT116细胞系中具有更高的METTL3表达,因此对其进行进一步分析。
(H) METTL14敲低组和对照组中眼黑色素瘤细胞(92.1和CRMM1)在DMSO或LBH589暴露后,METTL14相对于GAPDH的Western blot。 (I) METTL14敲低组或对照组中进行细胞聚落形成分析(colony-formation assay)以评估DMSO或LBH589处理后眼部黑色素瘤细胞(92.1和CRMM1)的生长。
该研究首先利用斑点杂交(Dot blot)和高效液相色谱串联质谱 (HPLC-MS/MS) 实验发现Bt Cry1Ac抗性小菜蛾中肠组织的m6A修饰水平显著升高(图1)。 图1. m6A修饰水平在Bt抗性和Bt诱导敏感种群中显著升高 为了进一步探索Bt Cry1Ac抗性小菜蛾中肠组织的m6A修饰水平显著升高的分子机制,作者克隆了小菜蛾中7个m6A甲基转移酶...
随后利用dot blot法检测整体m6A甲基化水平,结果揭示黑色素瘤细胞中的m6A甲基化水平低于正常黑色素细胞,这与黑色素瘤中的其他m6A发现一致。研究发现经LBH589处理后,眼部黑色素瘤细胞中的整体m6A甲基化增加,表明HDAC抑制可恢复眼部黑色素瘤中m6A甲基化水平。
研究人员鉴定了m6A甲基转移酶复合物的一个催化活性组分MdMTA。体外甲基转移实验(vitro methyl transfer assay)、斑点印迹杂交(dot blot)、LC-MS/MS和m6A-seq结果表明MdMTA是一个m6A甲基转移酶(writers),对m6A mRNA修饰至关重要。 进一步研究表明,MdMTA参与苹果抗旱性。干旱条件下的m6A-seq和RNA-seq分析结果表明,Md...