1、哺乳动物mRNA的m6A检测 作者首先通过dot blot的方法验证m6A抗体是否能与RNA上的m6A产生免疫反应,先分别将m6A修饰的寡聚核苷酸和非修饰的寡聚核苷酸点在尼龙膜上,然后用m6A抗体进行免疫反应,再将m6A修饰的寡聚核苷酸点在膜上,用于免疫反应的m6A抗体分别用不同浓度的修饰RNA和非修饰的RNA竞争结合后与膜上的m6A修饰...
总RNA/mRNA m6A/ac4C定量检测(Dot Blot法) 在斑点杂交中,要检测到的生物分子不是首先通过电泳分离出来的,相反,将含有被检测分子的混合物直接点在膜上,烘烤固定。然后与m6A或Ac4C抗体(Western blot)杂交后检测,步骤如下: (1)交联:在65℃下5分钟,使mRNA变性以破坏RNA中的二级结构。变性后立即在冰上冷却,以防止...
RNA/mRNA m6A定量检测(Dot Blot)RNA提取与质检、变性与交联、封闭、抗体孵育、显色、定量分析2~3周 客户提供 提供样本 Total RNA样本 细胞样本 组织样本 具体样本要求请详见《RNA甲基化(m6A)检测服务订购表》中附件:《送样要求》。 提供信息 物种信息,单基因检测提供目的基因 ...
1 总m6A修饰水平检测 (1)斑点杂交(Dot-blot) 将RNA全部提取出来,点在NC膜上,紫外交联固定,然后用m6A抗体进行杂交,洗膜,放射自显影,以斑点有无或颜色的深浅代表m6A修饰水平的高低。这个方法缺点就是误差很大,而且也不能精确判断某一特定RNA的修饰。 (2)液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS) 基于LC-MS的方法用于RNA...
Dot blot实验表明,m6A抗体能够与带有m6A修饰的URUAY motif结构的oligo特异性结合。 具体来说就是人工体外合成一段带有m6A修饰的oligo且具有URUAY motif结构,而在碱基序列不变的情况下没有m6A修饰的oligo作为对照。下一步就是与m6A抗体进行binding实验。 m6A基因与非m6A基因具有不同的序列特征 ...
Dot Blot参考文献:Nagarajan., et al. (2019). Dot Blot Analysis for Measuring Global N6-Methyladenosine Modification of RNA: Methods and Protocols. ② 酶标仪的最大优势是成本低速度快,3-4小时就能出来结果,三种方法里精确度较差但也是性价比较高的一种检测方法。需重复多次。不作为首要推荐检测方法 ...
作者首先通过dot blot的方法验证m6A抗体是否能与RNA上的m6A产生免疫反应,先分别将m6A修饰的寡聚核苷酸和非修饰的寡聚核苷酸点在尼龙膜上,然后用m6A抗体进行免疫反应,再将m6A修饰的寡聚核苷酸点在膜上,用于免疫反应的m6A抗体分别用不同浓度的修饰RNA和非修饰的RNA竞争结合后与膜上的m6A修饰的RNA进行免疫反应,说明该m6...
[37-38] 中这一特点, 采用同 位素标记法[39-41],薄层色谱[42]对 m6A 进行定位检 测.随着二代测序技术和质谱等技术的发展,研究 发现高效液相色谱可提高定量 m6A 的精确性并监测 其动态状态[13],抗体免疫印迹方法(dot-blot)同样 可以精确检测 m6A 的含量.此外,基于免疫沉淀法 识别 N6- 甲基腺苷位点的 ...
Comprehensive Analysis of mRNA Methylation Reveals Enrichment in 3' UTRs and Near Stop Codons 作者首先通过dot blot的方法验证m6A抗体是否能与RNA上的m6A产生免疫反应，先分别将m6A修饰的寡聚核苷酸和非修饰的寡聚核苷酸点在尼龙膜上，然后用m6A抗体进行免疫反应，再将m6A修饰的寡聚核苷酸点在膜上，...
Nagarajan et al. (2019). Dot Blot Analysis for Measuring Global N6-Methyladenosine Modification of RNA: Methods and Protocols. 问题4 与对照组相比,实验中甲基化基因和去甲基化基因都是高表达的,怎么解释METTL3的表达量显著升高,但是整体m6A水平降低,这个结果可能吗?