在fig2f中,通过加入转录抑制剂处理细胞,发现细胞内残留的METTL14随时间减少(降解),而沉默LNC942能够加速mRNA降解的速度。另外,m6A dot blot assay实验验证了LNC942沉默能够降低细胞整体的m6A水平(fig2G)。其实我们可以看到,作者只是比较基础地验证了LNC942能够维持METTL14的稳定性,但是对于中间的具体的机制是怎么样的,...
（F-G）细胞聚落形成分析(colony-formation assay)以评估用LBH589（100nmol/L）处理后正常黑色素细胞（...
1.将已知浓度的样本样品，用无酶离心管进行梯度稀释（并上操作）2.短暂离心，然后将RNA样品95℃加热3分钟，结束后迅速转到冰上冷却，防止重新形成二级结构。3.用1ml枪头粗端在NC膜上留下圆形印痕并用铅笔描圈，以引导加样，并将 NC膜裁剪成合适的尺寸，转移至干净的培养皿中。4.取2μl RNA样品按顺序滴在NC...
11. 清洗膜并采集图像。参考资料：RNA Dot Blot Protocol | Abcam
在这篇文章中,作者首先采用三种不同生化实验方法,即细胞内的co-IP、邻位连接实验(Proximity Ligation Assay)和pull-down实验证明TRMT10A与FTO有相互作用。这个结果引导进一步测试TRMT10A是否能够通过与FTO的相互作用来影响mRNA上的m6A修饰水...
研究人员鉴定了m6A甲基转移酶复合物的一个催化活性组分MdMTA。体外甲基转移实验(vitro methyl transfer assay)、斑点印迹杂交(dot blot)、LC-MS/MS和m6A-seq结果表明MdMTA是一个m6A甲基转移酶(writers),对m6A mRNA修饰至关重要。 进一步研究表明,MdMTA参与苹果抗旱性。干旱条件下的m6A-seq和RNA-seq分析结果表明,Md...
根据Abcam官网提供的RNA dot bloting protocol,进行实验在实验过程中适当更改实验条件,形成实验笔记。 RNA dot blot 一、试剂 RNA样本 无RNase水 TBST(1x TBS,0.1% Tween-20) 封闭液一抗 二抗(山羊抗兔 IgG-HRP, ab97051, 或山羊抗小鼠 IgG-HRP)
assay,ELISpot) [0274]通过干扰素γ(IFNγ)ELISpot检测MOG35-55应答T细胞的频率。在第0、3、7和10 天,将小鼠用非免疫原性MOG35-55 mRNA、非免疫原性无关mRNA或盐水进行处理。在第一次 处理之后第13天,分离不同处理组的脾并制备单细胞悬液。使用CD4(L3T4)微珠通过MACS纯 + 化CD4 T细胞。使用ELISpot试剂盒用...
本试剂盒抽提得到的RNA可用于反转录、RT-PCR、qPCR、Northern、点杂交(Dot Blot)、纯化mRNA、体外翻译、RNase protection assay、cDNA克隆等下游实验;也可用于基因表达芯片分析(microarray)、高通量测序(high throughput sequencing)等对RNA质量要求较高的情况。
有哪位做过RNA dot blot的大神，把你们的步骤给一下吧，，谢谢了