2.Journal of Experimental & Clinical Cancer Research|RNA dot blot 检测发现与 LNCaP 细胞相比,LNCaP-AI 和 C4-2 细胞中 mRNA 内的 m7 G 修饰水平更丰富 图源:Journal of Experimental & Clinical Cancer Research 图片分为两个 (A) 和 (B) 两部分...
16,用ddH2O清洗至背景大致干净即可,约30-60s 17,白光成像采集亚甲蓝染色后的图像作为负载对照。
1.将已知浓度的样本样品,用无酶离心管进行梯度稀释(并上操作) 2.短暂离心,然后将RNA样品95℃加热3分钟,结束后迅速转到冰上冷却,防止重新形成二级结构。 3.用1ml枪头粗端在NC膜上留下圆形印痕并用铅笔描圈,以引导加样,并将 NC膜裁剪成合适的尺寸,转移至干净的培养皿中。 4.取2μl RNA样品按顺序滴在NC膜...
1.将已知浓度的样本样品，用无酶离心管进行梯度稀释（并上操作）2.短暂离心，然后将RNA样品95℃加热3分钟，结束后迅速转到冰上冷却，防止重新形成二级结构。3.用1ml枪头粗端在NC膜上留下圆形印痕并用铅笔描圈，以引导加样，并将 NC膜裁剪成合适的尺寸，转移至干净的培养皿中。4.取2μl RNA样品按顺序滴在NC...
注意枪头不要碰膜。5. 干燥后，进行RNA与膜的交联。6. 清洗膜，洗去未结合的RNA。7. 孵育一抗，然后进行TBST清洗。8. 孵育二抗，再进行TBST清洗。9. 孵育ECL显影液。10. 显影仪下拍照，然后进行亚甲蓝染色。11. 清洗膜并采集图像。参考资料：RNA Dot Blot Protocol | Abcam ...
1. 斑点杂交(Dot blot) 斑点杂交(Dot blot)可检测和鉴定 DNA、RNA 和蛋白质,通过显影斑点的有无及颜色的深浅来判断是否有杂交及其杂交强度。在研究 RNA 修饰时,斑点杂交常用于对细胞内总RNA的修饰水平进行定性或半定量分析。具体步骤是:将待测的 RNA 变性后点加在硝酸纤维素膜或 NC 膜上,紫外交联固定后,用...
RNA Dot blot 实验流程 1、将已知浓度的样本样品,用无酶离心管进行梯度稀释(并上操作) 2、短暂离心,然后将RNA样品95℃加热3分钟,结束后迅速转到冰上冷却,防止 重新形成二级结构。 3、用1ml枪头粗端在NC膜上留下圆形印痕并用铅笔描圈,以引导加样,并将 NC膜裁剪成合适的尺寸,转移至干净的培养皿中。
rna dot-blot 紫外交联原理 RNA dot-blot(RNA斑点杂交)中的紫外交联原理主要涉及利用紫外线的能量使核酸分子与固相支持物(如尼龙膜)之间形成共价键,从而实现核酸的固定,以下是具体解释: 核酸的光吸收特性:核酸分子(包括RNA)中的碱基具有共轭双键结构,这使得它们在紫外线波段(尤其是254 - 260nm)有较强的吸收能力...
根据Abcam官网提供的RNA dot bloting protocol,进行实验在实验过程中适当更改实验条件,形成实验笔记。 RNA dot blot 一、试剂 RNA样本 无RNase水 TBST(1x TBS,0.1% Tween-20) 封闭液一抗 二抗(山羊抗兔 IgG-HRP, ab97051, 或山羊抗小鼠 IgG-HRP)
总RNA/mRNA m6A/ac4C定量检测(Dot Blot法) 在斑点杂交中,要检测到的生物分子不是首先通过电泳分离出来的,相反,将含有被检测分子的混合物直接点在膜上,烘烤固定。然后与m6A或Ac4C抗体(Western blot)杂交后检测,步骤如下: (1)交联:在65℃下5分钟,使mRNA变性以破坏RNA中的二级结构。变性后立即在冰上冷却,以防止...