2.Journal of Experimental & Clinical Cancer Research|RNA dot blot 检测发现与 LNCaP 细胞相比,LNCaP-AI 和 C4-2 细胞中 mRNA 内的 m7 G 修饰水平更丰富 图源:Journal of Experimental & Clinical Cancer Research 图片分为两个 (A) 和 (B) 两部分...
16,用ddH2O清洗至背景大致干净即可,约30-60s 17,白光成像采集亚甲蓝染色后的图像作为负载对照。
1.将已知浓度的样本样品，用无酶离心管进行梯度稀释（并上操作）2.短暂离心，然后将RNA样品95℃加热3分钟，结束后迅速转到冰上冷却，防止重新形成二级结构。3.用1ml枪头粗端在NC膜上留下圆形印痕并用铅笔描圈，以引导加样，并将 NC膜裁剪成合适的尺寸，转移至干净的培养皿中。4.取2μl RNA样品按顺序滴在NC...
一、实验材料 1. RNA待测样本（建议先进行mRNA纯化）2. 无酶水 3. TBST（1×TBS， 0.1%Tween-20）4. 封闭液 5. 一抗 6. 二抗 7. ECL显影液 8. 亚甲蓝染色缓冲液（0.4M醋酸钠、0.4M醋酸中的0.2%亚甲蓝）二、实验设备 无酶EP管 加热设备 NC膜 或 带正电荷的尼龙膜（建议使用尼龙...
1、将已知浓度的样本样品,用无酶离心管进行梯度稀释(并上操作) 2、短暂离心,然后将RNA样品95℃加热3分钟,结束后迅速转到冰上冷却,防止 重新形成二级结构。 3、用1ml枪头粗端在NC膜上留下圆形印痕并用铅笔描…
RNA Dot blot 实验流程 1、将已知浓度的样本样品,用无酶离心管进行梯度稀释(并上操作) 2、短暂离心,然后将RNA样品95℃加热3分钟,结束后迅速转到冰上冷却,防止 重新形成二级结构。 3、用1ml枪头粗端在NC膜上留下圆形印痕并用铅笔描圈,以引导加样,并将 NC膜裁剪成合适的尺寸,转移至干净的培养皿中。
总RNA/mRNA m6A/ac4C定量检测(Dot Blot法) 在斑点杂交中,要检测到的生物分子不是首先通过电泳分离出来的,相反,将含有被检测分子的混合物直接点在膜上,烘烤固定。然后与m6A或Ac4C抗体(Western blot)杂交后检测,步骤如下: (1)交联:在65℃下5分钟,使mRNA变性以破坏RNA中的二级结构。变性后立即在冰上冷却,以防止...
根据Abcam官网提供的RNA dot bloting protocol,进行实验在实验过程中适当更改实验条件,形成实验笔记。 RNA dot blot 一、试剂 RNA样本 无RNase水 TBST(1x TBS,0.1% Tween-20) 封闭液一抗 二抗(山羊抗兔 IgG-HRP, ab97051, 或山羊抗小鼠 IgG-HRP)
图2:单基因m6A位点检测方法 位点特异性m6A检测方法示意图:MeRIP-qRT-PCR、SELECT和SCARLET。 总结而言,目前已经开发出的不同层面m6A修饰检测方法主要有: 1)整体水平检测:TLC、Dot-blot和LC-MS/MS; 2)转录组范围内m6A修饰高通量检测(图1): 基于特异性抗体的测序技术(MeRIP-seq/m6A-seq、m6A-seq2、m6A-CLIP/...
dsRNA检测方法包括dot blot(免疫斑点)、ELISA(酶联免疫吸附实验)、HTRF(均相时间分辨荧光)和HPLC。HPLC方法中,dsRNA的峰和主峰有时分不开,分辨率和准确度不够。Dot blot法中,首先将dsRNA标准品和待检mRNA样品滴在尼龙膜上,干燥、封闭后,加入检测抗体J2,孵育1hr后,洗去未结合检抗,再加入酶标二抗,同样孵育1hr后,...