PCR-SSCP技术是一种分子生物学分析方法，由日本Orita等于1989年创建，是筛查突变的新技术。这种技术结合了PCR（聚合酶链式反应）和SSCP（单链构象多态性）的原理。PCR技术是一种在引物参与下，由酶催化特定克隆或基因组DNA序列进行的体外扩增反应。它具有灵敏度高、简便、快速的特点，且对标本的纯度要求低。而SSCP技术...
在干净的 PCR 管底部加入 5ul SSCP 上样缓冲液(变性缓 冲液,同《分子克隆》中的测序缓冲液),然后在缓冲液中央加入 PCR 扩增产物。按照经验,扩 增效果在琼脂糖胶上能看出比较亮的带的样品加 1ul,效果很好加 0.5ul,如果不太好就适当增加 1.5、2 或 3 不等,同时加大上样缓冲液的量,比如加 3ul 的 PCR ...
单链构型多态性分析法(PCR-SSCP):将PCR产物双链DNA(dsDNA)变性为单链DNA(ssDNA),加样于变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳,由于DNA分子在凝胶中的电泳迁移率与其分子量和空间结构有关,而空间结构又与ssDNA序列有关。因此,电泳结束后,ssDNA带位置的差异即可反映出PCR产物序列的差异,从而对DNA中的单个碱基的替代、微小缺失或...
P C R — S S C P 谢雪晴 PCR-SSCP(PolymeraseChainReaction-SingleStrand ConformationPolymerase,多聚酶链式反应-单链构象多肽) 分析法是一种DNA单链凝胶电泳技术; 它根据形成不同构象的等长DNA单链中中性聚丙烯酰胺凝 胶中电泳迁移率变化来检测基因变异。 PCR-SSCP 01 PCR-SSCP技术原理及特点 C 目录 内容 ...
聚合酶链反应-单链构象多态性分析(Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP)是近年来发展起来的一种基因分析方法。 PCR-SSCP分析的基本程序为:首先PCR扩增特定靶序列,然后将扩增产物变性为单链,进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶中...
PCR-SSCP技术是一种分子生物学分析方法,由日本Orita等于1989年创建,是筛查突变的新技术。这种技术结合了PCR(聚合酶链式反应)和SSCP(单链构象多态性)的原理。 PCR技术是一种在引物参与下,由酶催化特定克隆或基因组DNA序列进行的体外扩增反应。它具有灵敏度高、简便、快速的特点,且对标本的纯度要求低。
聚合酶链式反应一单链构象多态性(PCR-SSCP)分析技术为分子生物学的研究提供了一个简单、快捷、经济的手段。在该技术中,首先利用PCR技术扩增目的DNA,扩增时利用引物标记法或碱基掺入法使扩增的产物带有标记,如荧光物质、同位素、生物素等。然后将扩增产物变性并进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,区别扩增产物一定长度核苷酸的...
(一)PCR-单链构象多态性(PCR-single-strand conformation polymorphism,SSCP) PCR-SSCP是近年来发展起来的一种分析突变基因的方法,由于该方法对检测基因的单个碱量置换和某一片段DNA突变位点的筛查提供了有效而快速的手段,现已广泛应用于遗传及恶性肿癌基因突变的分析. 1.PCR-SSCP的原理 PCR-SSCP于1989年首先报道,...
PCR-SSCP是对未知单核苷酸多态性(SNPs)进行检测最简便,最实用的方法之一.该方法检测的灵敏度易受片段大小的影响.以大小在200bp左右的PCR扩增产物为检测对象,对该方法的影响因素进行了分析.结果表明,在4℃条件下,10 V/cm恒压电泳10～16 h,在上样缓冲液中加入10%甘油,在12%～15%的非变性聚丙烯酰胺(arc:bis=...