SSCP是单链构象多态性(single-strand conformation polymorphism,SSCP)的缩写。其原理是当双链DNA变性为两条单链后,各自会在中性条件下形成各自特定的空间构象,因而在电泳时将在不同的位置上出现各自电泳条带。如果DNA序列发生变化,甚至只有一个碱基变化,空间构象也有可能发生变化,电泳条带也随之变化。也就是说在相同...
PCR-SSCP是由1989年在日本创建的一种用于筛选突变的新技术，它是一种简单，快速且经济的点突变筛选方法。PCR-SSCP技术的基本原理是将PCR扩增后的DNA片段变性为单链DNA，在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳单链DNA时，会形成不同的三维构象，其构象直接影响游泳速度，具有串联长度的DNA的单链的核苷酸序列的至少一部分可以产生...
聚合酶链式反应一单链构象多态性(PCR-SSCP)分析技术为分子生物学的研究提供了一个简单、快捷、经济的手段。在该技术中,首先利用PCR技术扩增目的DNA,扩增时利用引物标记法或碱基掺入法使扩增的产物带有标记,如荧光物质、同位素、生物素等。然后将扩增产物变性并进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,区别扩增产物一定长度核苷酸的...
3.PCR 产物变性。加好的样品进行离心,使样品集中在管底。PCR 仪上 95℃变性 10 分钟, 立即取出 PCR 产物连同架子一同置于冰上静置 5min,以免变性的产物复性。 注:3 和 4 步可以在制 SSCP 胶第四步后,等胶凝的过程中进行。 二.制胶 1. 装板。在所要进行实验的每一副玻璃板先用自来水冲洗,然后使用 d...
PCR-SSCP技术的基本原理是PCR扩增后的DNA片段经变性成单链DNA,单链DNA在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳时形成不同的立体构象,其构象直接影响泳动速率,相同长度的 DNA单链其核苷酸顺序仅有单个碱基的差别,就可以产生立体构象的不同,造成泳动速率的不同,产生不同的泳动带。
在进行SSCP前首先要通过PCR扩增出特异性好的产物(琼脂糖电泳不能有过强的拖尾)。 1)制备聚丙烯酰胺凝胶(PAG) 按上表制所需的胶液,将梳子插入模子,从梳子一端加入胶,当胶液快到梳齿时,使 模子向加胶端倾斜,继续慢慢加胶,边加边放端模子以防止气泡形成,室温放置1h使 之凝固.然后拔掉梳子,顶部加入1×TBE封闭...
PCR-SSCP实验步骤(仅供参考) 1、PCR(例:15uL体系,n个样) A、取n个PCR管,做好标号。 B、配混合液(1.5mL离心管中) mix(n+1)×7.5uL DNApol(n+1)×0.15 uL 引物(上)(n+1)×0.2 uL 引物(下)(n+1)×0.2 uL 无菌水(n+1)×5.95 uL C、分装:14uL/PCR管。(注意枪头最好插到PCR管底部,打出...
PCR-SSCP技术是一种分子生物学分析方法，由日本Orita等于1989年创建，是筛查突变的新技术。这种技术结合了PCR（聚合酶链式反应）和SSCP（单链构象多态性）的原理。PCR技术是一种在引物参与下，由酶催化特定克隆或基因组DNA序列进行的体外扩增反应。它具有灵敏度高、简便、快速的特点，且对标本的纯度要求低。而SSCP技术...
聚合酶链式反应一单链构象多态性(PCR-SSCP)分析技术为分子生物学的研究提供了一个简单、快捷、经济的手段。在该技术中,首先利用PCR技术扩增目的DNA,扩增时利用引物标记法或碱基掺入法使扩增的产物带有标记,如荧光物质、同位素、生物素等。然后将扩增产物变性并进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,区别扩增产物一定长度核苷酸的...