PCR 产物为 10ng/nl 左右为最佳。 2.PCR 产物与变性 buffer 混合。在干净的 PCR 管底部加入 5ul SSCP 上样缓冲液(变性缓 冲液,同《分子克隆》中的测序缓冲液),然后在缓冲液中央加入 PCR 扩增产物。按照经验,扩 增效果在琼脂糖胶上能看出比较亮的带的样品加 1ul,效果很好加 0.5ul,如果不太好就适当增加...
SSCP是单链构象多态性(single-strand conformation polymorphism,SSCP)的缩写。其原理是当双链DNA变性为两条单链后,各自会在中性条件下形成各自特定的空间构象,因而在电泳时将在不同的位置上出现各自电泳条带。如果DNA序列发生变化,甚至只有一个碱基变化,空间构象也有可能发生变化,电泳条带也随之变化。也就是说在相同...
PCR-SSCP是由1989年在日本创建的一种用于筛选突变的新技术，它是一种简单，快速且经济的点突变筛选方法。PCR-SSCP技术的基本原理是将PCR扩增后的DNA片段变性为单链DNA，在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳单链DNA时，会形成不同的三维构象，其构象直接影响游泳速度，具有串联长度的DNA的单链的核苷酸序列的至少一部分可以产生...
PCR-SSCP技术是一种分子生物学分析方法，由日本Orita等于1989年创建，是筛查突变的新技术。这种技术结合了PCR（聚合酶链式反应）和SSCP（单链构象多态性）的原理。PCR技术是一种在引物参与下，由酶催化特定克隆或基因组DNA序列进行的体外扩增反应。它具有灵敏度高、简便、快速的特点，且对标本的纯度要求低。而SSCP技术...
PCR-SSCP是在完成靶DNA的PCR扩增之后进行单链DNA多态性分析的一种新方法。将单链的扩增DNA或组织基因组DNA通过中性的聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据其电泳位置的改变可分辨出单个碱基的改变。二、PCR-SSCP基本过程 1．PCR扩增靶DNA。2．PCR产物的快速变性而后快速复性，形成特定空间结构的DNA单链分子。3.非变性的聚丙烯...
或要求实验条件高,不适合一般临床实验室使用.1989年问世的PCR-SSCP(下文称SSCP)作为检测基因突变的方法,经不断地改进和完善,更为简便、快速、灵敏,不但用于检测基因点突变和短序列的缺失和插入,而且还被用于DNA定量分析,监测PCR诊断实验中的交*污染情况,以及传染源的调查等.由于SSCP的突出的优点,近几年被大量地...
4. PCR产物变性。加好的样品进行离心,使样品集中在管底。PCR仪上95变性5-10分钟,立即取出PCR产物连同架子一同置于冰上静置5min,以免变性的产物复性。 *注:3和4步可以在制SSCP胶第四步后,等胶凝的过程中进行。 二. 制胶 1. 装板。在所要进行实验的每一副玻璃板(事先洗静、风干)的两边及底部装上垫片,尽...
1 1. PCR反应（同前）PCR产物经琼脂糖电泳确认。2 2. PCR反应结束后，取5μl扩增产物加10μl甲酰胺上样缓冲液混匀，98℃ 变性10分钟，迅速冰浴 3 3. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。（1）制备50 ml 6%非变性聚丙烯酰胺凝胶，加 TEMED 25 μl、10%过硫酸铵250 μl，混匀后灌胶，插入加样梳子。待胶完全...
聚合酶链式反应一单链构象多态性(PCR-SSCP)分析技术为分子生物学的研究提供了一个简单、快捷、经济的手段。在该技术中，首先利用PCR技术扩增目的DNA，扩增时利用引物标记法或碱基掺入法使扩增的产物带有标记，如荧光物质、同位素、生物素等。然后将扩增产物变性并进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，区别扩增产物...