CR-SSCP法:是一种基于单项链DNA构象差别的快速、敏感、有效的检测基于点突变的DNA多态方法。其基本原理是对已知基因点突变的遗传病,在其突变位点附近设计引物进行PCR扩增,将扩增的产物取出一部分,在96%的甲酰胺中变性,然后在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶电泳中电泳,由于单链DNA中碱基对或聚集,当温度或变性剂等环...
SSCP法除大量地用于基因突变的检测外,还用于病毒的分型、监测PCR实验中的污染情况、以及病原体传播途径的研究中。Yap用巢式PCR对来自不同国家和地区的HBV标品 进行了检测,并对扩增产物进行了SSCP分析,发现每个标本的SSCP图谱完全不同,不仅证明了HBVDNA具有地区性变异,而且排除了交叉性污染的可能性,为保证PCR诊断结果...
(Single-Strand Conformation Polymorphism,SSCP)分析.在随后的研究中,作者又 将SSCP用于检查PCR扩增产物的基因突变,从而建立了PCR-SSCP技术,进一步提高了 检测突变方法的简便性和灵敏性.其基本过程是:①PCR扩增靶DNA;②将特异的PCR扩增 产物变性,而后快速复性,使之成为具有一定空间结构的单链DNA分子;③将适量的单 链...
Yap用巢式PCR对来自不同国家和地区的HBV标品 进行了检测,并对扩增产物进行了SSCP分析,发现每个标本的SSCP图谱完全不同,不仅证明了HBVDNA具有地区性变异,而且排除了交叉性污染的可能性,为保证PCR诊断结果的可靠性找到了好方法。另外,Yap等还将SSCP用于DNA定量分析上,他们将SSCP 与竞争性PCR法相结合进行乳腺癌细胞突变...
目的使用PCR-SSCP的方法鉴定正确阳性克隆的cDNA片段,解决从差异显示序列凝胶中纯化序列不均一性的PCR产物所来带的实验误差。方法差异显示方法、PCR片段克隆、质粒DNA扩增、PCR-SSCP电泳。结果经基因测序分析证实cDNA克隆片段的PCR-SSCP电泳带泳动位置相同,基因序列也相同,电泳带泳动位置不同,基因序列也不同。结论使用PCR...
分析法是一种DNA单链凝胶电泳技术; 它根据形成不同构象的等长DNA单链中中性聚丙烯酰胺凝 胶中电泳迁移率变化来检测基因变异。 PCR-SSCP 01 PCR-SSCP技术原理及特点 C 目 录 内容 02 PCR-SSCP技术基本过程 03 PCR-SSCP技术实验操作 •PCR-SSCP技术的基本原理是PCR扩增后的DNA片段经变性成单 ...
(PCR—sscP)的方法检测35例乳腺癌患者和20例良性肿瘤患者外周血中p53基因外显子5—8的突变情况。[结 果]乳腺癌患者D53基因突变的检出率为40.O%(14/35),显著高于对照组良性肿瘤患者的5.O%(1/20)(P< O.O5)。[结论]p53基因突变在乳腺癌外周血中有较高的检出率,是乳腺癌发生的早期信号。
2. PCR-SSCP方法 单链构象多态性分析(single-strand conformation polymorphism,SSCP)是一种简单、高效地检测DNA或RNA序列中点突变的技术,由于实验成本较低,也是一种目前较为常用的方法。 检测原理: 单链DNA片段呈复杂的空间折叠构象,这种立体结构主要是由其内部碱基配对等分子内相互作用力来维持的,当有一个碱基发生...
方法:提取18例中国X连锁显性遗传型AS患者基因组DNA,据COL4A5基因中与外显子相邻的内含子序列设计引物,分别作DNA聚合酶链式反应(PCR),扩增了该基因第20～51外显子。以琼脂糖凝胶电泳鉴定产物,作单链构象多态性(SSCP)分析检测PCR产物,对迁移率异常者进行DNA测序。结果:PCR-SSCP分析发现患者8的20、39和46外显子,...
PCR—SSCP法检测耐多药结核分支杆菌耐药性 维普资讯 http://www.cqvip.com