CR-SSCP法:是一种基于单项链DNA构象差别的快速、敏感、有效的检测基于点突变的DNA多态方法。其基本原理是对已知基因点突变的遗传病,在其突变位点附近设计引物进行PCR扩增,将扩增的产物取出一部分,在96%的甲酰胺中变性,然后在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶电泳中电泳,由于单链DNA中碱基对或聚集,当温度或变性剂等环...
SSCP法除大量地用于基因突变的检测外,还用于病毒的分型、监测PCR实验中的污染情况、以及病原体传播途径的研究中。Yap用巢式PCR对来自不同国家和地区的HBV标品 进行了检测,并对扩增产物进行了SSCP分析,发现每个标本的SSCP图谱完全不同,不仅证明了HBVDNA具有地区性变异,而且排除了交叉性污染的可能性,为保证PCR诊断结果...
PCR-SSCP法 1)提取DNA 同前RFLP法 2)PCR扩增 同前PCR-RFLP,也可加入1μCi32P-dCTP标记产物。 3)非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 1.取PCR的扩增产物,加凝胶加样液3μl,95℃加热变性2min,冰浴骤冷。同位素掺入的DNA取1μl稀释10倍,加样3μl。 2.取样品用微量加样器加入非变性聚丙烯酰胺凝胶样品孔中,200V电泳...
分析法是一种DNA单链凝胶电泳技术; 它根据形成不同构象的等长DNA单链中中性聚丙烯酰胺凝 胶中电泳迁移率变化来检测基因变异。 PCR-SSCP 01 PCR-SSCP技术原理及特点 C 目 录 内容 02 PCR-SSCP技术基本过程 03 PCR-SSCP技术实验操作 •PCR-SSCP技术的基本原理是PCR扩增后的DNA片段经变性成单 ...
PCR—SSCP法检测耐多药结核分支杆菌耐药性 维普资讯 http://www.cqvip.com
在进行SSCP前首先要通过PCR扩增出特异性好的产物(琼脂糖电泳不能有过强的拖尾)。 1)制备聚丙烯酰胺凝胶(PAG) 按上表制所需的胶液,将梳子插入模子,从梳子一端加入胶,当胶液快到梳齿时,使 模子向加胶端倾斜,继续慢慢加胶,边加边放端模子以防止气泡形成,室温放置1h使 之凝固.然后拔掉梳子,顶部加入1×TBE封闭...
A.PCR-SSCP只能作为一种突变检测方法,要最后确定突变的位置和类型,还需进一步测 序。 B.由于SSCP是依据点突变引起单链DNA分子立体构象的改变来实现电泳分离的,这样 就可能会出现当某些位置的点突变对单链DNA分子立体构象的改变不起作...
pcr sscp法检测非小细胞肺癌中fadd基因突变的研究.doc,法检测非小细胞肺癌中基因突变的研究摘要检测相关死亡结构域蛋白基因在人非小细胞肺癌中的突变情况以探讨该基因在肺癌发生发展中的作用及机制方法采用聚合酶链反应单链构象多态性分析检测例原发灶癌组织及例癌旁正常肺
目的使用PCR-SSCP的方法鉴定正确阳性克隆的cDNA片段,解决从差异显示序列凝胶中纯化序列不均一性的PCR产物所来带的实验误差。方法差异显示方法、PCR片段克隆、质粒DNA扩增、PCR-SSCP电泳。结果经基因测序分析证实cDNA克隆片段的PCR-SSCP电泳带泳动位置相同,基因序列也相同,电泳带泳动位置不同,基因序列也不同。结论使用PCR...
方法:提取18例中国X连锁显性遗传型AS患者基因组DNA,据COL4A5基因中与外显子相邻的内含子序列设计引物,分别作DNA聚合酶链式反应(PCR),扩增了该基因第20～51外显子。以琼脂糖凝胶电泳鉴定产物,作单链构象多态性(SSCP)分析检测PCR产物,对迁移率异常者进行DNA测序。结果:PCR-SSCP分析发现患者8的20、39和46外显子,...