CR-SSCP法:是一种基于单项链DNA构象差别的快速、敏感、有效的检测基于点突变的DNA多态方法。其基本原理是对已知基因点突变的遗传病,在其突变位点附近设计引物进行PCR扩增,将扩增的产物取出一部分,在96%的甲酰胺中变性,然后在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶电泳中电泳,由于单链DNA中碱基对或聚集,当温度或变性剂等环...
SSCP是单链构象多态性(single-strand conformation polymorphism,SSCP)的缩写。其原理是当双链DNA变性为两条单链后,各自会在中性条件下形成各自特定的空间构象,因而在电泳时将在不同的位置上出现各自电泳条带。如果DNA序列发生变化,甚至只有一个碱基变化,空间构象也有可能发生变化,电泳条带也随之变化。也就是说在相同...
PCR-SSCP是由1989年在日本创建的一种用于筛选突变的新技术，它是一种简单，快速且经济的点突变筛选方法。PCR-SSCP技术的基本原理是将PCR扩增后的DNA片段变性为单链DNA，在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳单链DNA时，会形成不同的三维构象，其构象直接影响游泳速度，具有串联长度的DNA的单链的核苷酸序列的至少一部分可以产生...
PCR-SSCP技术是一种分子生物学分析方法，由日本Orita等于1989年创建，是筛查突变的新技术。这种技术结合了PCR（聚合酶链式反应）和SSCP（单链构象多态性）的原理。PCR技术是一种在引物参与下，由酶催化特定克隆或基因组DNA序列进行的体外扩增反应。它具有灵敏度高、简便、快速的特点，且对标本的纯度要求低。而SSCP技术...
PCR-SSCP是1989年日本关谷实验室结合PCR反应和单链DNA非变性聚丙烯胺电泳首先创立的,其基本原理是:在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,DNA单链的迁移率除与DNA链的长短有关外,更主要的是取决于DNA单链所形成的构象。在非变性条件下,DNA单链可自身折叠形成具有一定空间结构的构象。这种构象由DNA单链碱基顺序...
为了进一步提高SSCP的检出率,可将SSCP分析与其它突变检测方法相结合.其中与杂交双链分析(Heterocluplex analysis,Het)法结合可以大大提高检出率.Het法是用探针与要检测的单链DNA或RNA进行杂交,含有一对碱基对错配的杂交链可以和完全互补的杂交链在非变性PAG凝胶上通过电泳被分离开.对同一靶序列分别进行SSCP和Het分析可...
聚合酶链式反应一单链构象多态性(PCR-SSCP)分析技术为分子生物学的研究提供了一个简单、快捷、经济的手段。在该技术中,首先利用PCR技术扩增目的DNA,扩增时利用引物标记法或碱基掺入法使扩增的产物带有标记,如荧光物质、同位素、生物素等。然后将扩增产物变性并进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,区别扩增产物一定长度核苷酸的...
目的使用PCR-SSCP的方法鉴定正确阳性克隆的cDNA片段,解决从差异显示序列凝胶中纯化序列不均一性的PCR产物所来带的实验误差。方法差异显示方法、PCR片段克隆、质粒DNA扩增、PCR-SSCP电泳。结果经基因测序分析证实cDNA克隆片段的PCR-SSCP电泳带泳动位置相同,基因序列也相同,电泳带泳动位置不同,基因序列也不同。结论使用PCR...
SSCP还用于检 测引起人类遗传性疾病的研究上,如在囊性纤维化中起作用的CFTR基因、神经纤维瘤1型基因、家族性结肠息肉基因的研究中.最近,Sharkar等用 RNA-SSCP法检测了28名B 型血友病患者的凝血因子IX的基因序列,并与DNA-SSCP和直接基因测序法进行了比 较,发现在全长2.6kbp的凝血因子IX基因组中,有20处碱基点...