CR-SSCP法:是一种基于单项链DNA构象差别的快速、敏感、有效的检测基于点突变的DNA多态方法。其基本原理是对已知基因点突变的遗传病,在其突变位点附近设计引物进行PCR扩增,将扩增的产物取出一部分,在96%的甲酰胺中变性,然后在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶电泳中电泳,由于单链DNA中碱基对或聚集,当温度或变性剂等环...
PCR-SSCP法 1)提取DNA 同前RFLP法 2)PCR扩增 同前PCR-RFLP,也可加入1μCi32P-dCTP标记产物。 3)非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 1.取PCR的扩增产物,加凝胶加样液3μl,95℃加热变性2min,冰浴骤冷。同位素掺入的DNA取1μl稀释10倍,加样3μl。 2.取样品用微量加样器加入非变性聚丙烯酰胺凝胶样品孔中,200V电泳...
为了进一步提高SSCP的检出率,可将SSCP分析与其它突变检测方法相结合.其中与杂交双链分析(Heterocluplex analysis,Het)法结合可以大大提高检出率.Het法是用探针与要检测的单链DNA或RNA进行杂交,含有一对碱基对错配的杂交链可以和完全互补的杂交链在非变性PAG凝胶上通过电泳被分离开.对同一靶序列分别进行SSCP和Het分析可...
PCR-SSCP原理及应用(1)PCR-SSCP原理及应用 随着分子生物学技术的发展，检测基因结构和突变的方法不断涌现.尤其是PCR技术问世以后，各种与PCR相结合的基因检测技术进一步推动了基因研究的发展.如不对称PCR产物的直接测序、核糖核酸酶酶切法(Ribonuclease cleavage，RNAase)、限制性片段长度多态性分析(Restriction Fragment ...
SSCP还用于检 测引起人类遗传性疾病的研究上,如在囊性纤维化中起作用的CFTR基因、神经纤维瘤1型基因、家族性结肠息肉基因的研究中.最近,Sharkar等用 RNA-SSCP法检测了28名B 型血友病患者的凝血因子IX的基因序列,并与DNA-SSCP和直接基因测序法进行了比 较,发现在全长2.6kbp的凝血因子IX基因组中,有20处碱基点...
PCR—SSCP分析法检测宫颈癌中H—ras、 p。基因突变与HPV感染 fi7;7.;; .; 、/ ’ .. 邱小萍 伍欣皇 丁晓华 谭 云 赵文先 戴天力 7}, ;『_z 摘要 我们对40例宫颈癌活检组织同时进行HPV、H-ras、p”基因的检测,应用 GP.PCR技术检测了多型HPV的感染,发现阳性率为85 ...
PCR SSCP法检测非小细胞肺癌中FADD基因突变的研究医学论文目录0引言1资料与方法1.1标本62例肺癌组织及13例癌旁正常组织标本取自武汉大学医学院病理教研室存档的1998年1月～2002年7月的组织蜡块1.2模板DNA的提取石蜡包埋组织模板DNA的提取参考文献[7]进行1.3PCP SSCP 银染我们选取FADD基因的第一外显子区域扩增1.4统计...
目的使用PCR-SSCP的方法鉴定正确阳性克隆的cDNA片段,解决从差异显示序列凝胶中纯化序列不均一性的PCR产物所来带的实验误差。方法差异显示方法、PCR片段克隆、质粒DNA扩增、PCR-SSCP电泳。结果经基因测序分析证实cDNA克隆片段的PCR-SSCP电泳带泳动位置相同,基因序列也相同,电泳带泳动位置不同,基因序列也不同。结论使用PCR...
1.取上述患者及部分患者父母及兄弟姐妹的外周血10 ml,枸橼酸钾抗凝,按盐析法[9]提取基因组DNA,4℃保存。同法提取正常对照的DNA。 2.根据已报道的COL4A5基因序列[10],选取与外显子相邻的内含子序列设计引物(表1),迄今所扩增的序列为COL4A5基因的第20～51外显子(自5′端记数),引物由Genosys Biotechnologies...
自从Orita等用SSCP进行人类DNA多态性分析以来,该方法大量地用于检测和肿瘤发生 有关的基因突变,例如检测星形细胞瘤、脑瘤、小细胞肺癌、胃癌、肠癌等肿瘤中的 p53基因的突变、肺癌的ras基因突变等.最近Sugano等用银染色SSCP法,成功地检测 了c-Ki-ras2基因第12位的突变,电泳和银染色过程在2.5小时内完成。SSCP还用于...