CR-SSCP法:是一种基于单项链DNA构象差别的快速、敏感、有效的检测基于点突变的DNA多态方法。其基本原理是对已知基因点突变的遗传病,在其突变位点附近设计引物进行PCR扩增,将扩增的产物取出一部分,在96%的甲酰胺中变性,然后在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶电泳中电泳,由于单链DNA中碱基对或聚集,当温度或变性剂等环...
单链构型多态性分析法(PCR-SSCP):将PCR产物双链DNA(dsDNA)变性为单链DNA(ssDNA),加样于变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳,由于DNA分子在凝胶中的电泳迁移率与其分子量和空间结构有关,而空间结构又与ssDNA序列有关。因此,电泳结束后,ssDNA带位置的差异即可反映出PCR产物序列的差异,从而对DNA中的单个碱基的替代、微小缺失或...
为了进一步提高SSCP的检出率,可将SSCP分析与其它突变检测方法相结合.其中与杂交双链分析(Heterocluplex analysis,Het)法结合可以大大提高检出率.Het法是用探针与要检测的单链DNA或RNA进行杂交,含有一对碱基对错配的杂交链可以和完全互补的杂交链在非变性PAG凝胶上通过电泳被分离开.对同一靶序列分别进行SSCP和Het分析可...
sscppcr分析法构象单链snps P C R — S S C P 谢雪晴 PCR-SSCP(PolymeraseChainReaction-SingleStrand ConformationPolymerase,多聚酶链式反应-单链构象多肽) 分析法是一种DNA单链凝胶电泳技术; 它根据形成不同构象的等长DNA单链中中性聚丙烯酰胺凝 胶中电泳迁移率变化来检测基因变异。 PCR-SSCP 01 PCR-SSCP技术...
SSCP还用于检 测引起人类遗传性疾病的研究上,如在囊性纤维化中起作用的CFTR基因、神经纤维瘤1型基因、家族性结肠息肉基因的研究中.最近,Sharkar等用 RNA-SSCP法检测了28名B 型血友病患者的凝血因子IX的基因序列,并与DNA-SSCP和直接基因测序法进行了比 较,发现在全长2.6kbp的凝血因子IX基因组中,有20处碱基点...
PCR-SSCP法 1)提取DNA 同前RFLP法 2)PCR扩增 同前PCR-RFLP,也可加入1μCi32P-dCTP标记产物。 3)非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 1.取PCR的扩增产物,加凝胶加样液3μl,95℃加热变性2min,冰浴骤冷。同位素掺入的DNA取1μl稀释10倍,加样3μl。 2.取样品用微量加样器加入非变性聚丙烯酰胺凝胶样品孔中,200V电泳...
1、PCR-SSCP 原理及应用随着分子生物学技术的发展,检测基因结构和突变的方法不断涌现.尤其是 PCR 技术问 世以后,各种与PCR 相结合的基因检测技术进一步推动了基因研究的发展.如不对称PCR 产物的直接测序、核糖核酸酶酶切法(Ribonuclease cleavage, RNAase) 、限制性片段长度多态性分析(RestrictionFragment Length ...
1.直接测序法进行SNP分析 在所有SNP的检测方法中,对欲检测片段进行直接扩增、测序是最为准确的方法。通常情况下,纯合型SNP位点的测序峰为单一峰型,而杂合型SNP位点的测序峰为套峰,因而很容易将其区分开来。通过直接测序方法进行SNP检测的检出率接近100%。
自从Orita等用SSCP进行人类DNA多态性分析以来,该方法大量地用于检测和肿瘤发生有关的基因突变,例如检测星形细胞瘤、脑瘤、小细胞肺癌、胃癌、肠癌等肿瘤中的P53基因的突变、肺癌的ras基因突变等.最近Sugano等用银染色SSCP法,成功地检测了c-Ki-ras2基因第12位的突变,电泳和银染色过程在2.5小时内完成.SSCP还用于检测引...
Keywords: 非同位素,PCR-SSCP,临床应用,实验室诊断 Full-Text Cite this paper Add to My Lib Abstract: 单链构象多态性检测法(PCR-SSCP)是近年发展起来的一项项检测人类基因组突变的新技术,然而,在该技术中需要使用放射性同位素标让的核苷酸或引物,从而限制了其广泛临床研究及诊断方面的应用。本文报告一种的PCR...