CR-SSCP法:是一种基于单项链DNA构象差别的快速、敏感、有效的检测基于点突变的DNA多态方法。其基本原理是对已知基因点突变的遗传病,在其突变位点附近设计引物进行PCR扩增,将扩增的产物取出一部分,在96%的甲酰胺中变性,然后在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶电泳中电泳,由于单链DNA中碱基对或聚集,当温度或变性剂等环...
为了进一步提高SSCP的检出率,可将SSCP分析与其它突变检测方法相结合.其中与杂交双链分析(Heterocluplex analysis,Het)法结合可以大大提高检出率.Het法是用探针与要检测的单链DNA或RNA进行杂交,含有一对碱基对错配的杂交链可以和完全互补的杂交链在非变性PAG凝胶上通过电泳被分离开.对同一靶序列分别进行SSCP和Het分析可...
PCR-SSCP法 1)提取DNA 同前RFLP法 2)PCR扩增 同前PCR-RFLP,也可加入1μCi32P-dCTP标记产物。 3)非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 1.取PCR的扩增产物,加凝胶加样液3μl,95℃加热变性2min,冰浴骤冷。同位素掺入的DNA取1μl稀释10倍,加样3μl。 2.取样品用微量加样器加入非变性聚丙烯酰胺凝胶样品孔中,200V电泳...
SSCP法除大量地用于基因突变的检测外,还用于病毒的分型、监测PCR实验中的污染情况、以及病原体传播途径的研究中。Yap用巢式PCR对来自不同国家和地区的HBV标品 进行了检测,并对扩增产物进行了SSCP分析,发现每个标本的SSCP图谱完全不同,不仅证明了HBVDNA具有地区性变异,而且排除了交叉性污染的可能性,为保证PCR诊断结果...
热度: [DOC] 新疆细毛羊和陕北细毛羊羊毛细度候选基因的PCR-SSCP分析 热度: P C R — S S C P 谢 雪 晴 PCR-SSCP(PolymeraseChainReaction-SingleStrand ConformationPolymerase,多聚酶链式反应-单链构象多肽) 分析法是一种DNA单链凝胶电泳技术;
1.直接测序法进行SNP分析 在所有SNP的检测方法中,对欲检测片段进行直接扩增、测序是最为准确的方法。通常情况下,纯合型SNP位点的测序峰为单一峰型,而杂合型SNP位点的测序峰为套峰,因而很容易将其区分开来。通过直接测序方法进行SNP检测的检出率接近100%。 2. PCR-SSCP方法 单链构象多态性分析(single-strand conform...
PCR-SSCP原理及应用(1)PCR-SSCP原理及应用 随着分子生物学技术的发展，检测基因结构和突变的方法不断涌现.尤其是PCR技术问世以后，各种与PCR相结合的基因检测技术进一步推动了基因研究的发展.如不对称PCR产物的直接测序、核糖核酸酶酶切法(Ribonuclease cleavage，RNAase)、限制性片段长度多态性分析(Restriction Fragment ...
目的使用PCR-SSCP的方法鉴定正确阳性克隆的cDNA片段,解决从差异显示序列凝胶中纯化序列不均一性的PCR产物所来带的实验误差。方法差异显示方法、PCR片段克隆、质粒DNA扩增、PCR-SSCP电泳。结果经基因测序分析证实cDNA克隆片段的PCR-SSCP电泳带泳动位置相同,基因序列也相同,电泳带泳动位置不同,基因序列也不同。结论使用PCR...
1.直接测序法进行SNP分析 在所有SNP的检测方法中,对欲检测片段进行直接扩增、测序是最为准确的方法。通常情 况下,纯合型SNP位点的测序峰为单一峰型,而杂合型SNP位点的测序峰为套峰,因而
法可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳将不同迁移率的突变单链DNA分离,并且还可以进一步提纯。用这种方法可以最终从DNA序列水平上鉴别突变DNA片段。 二、SSCP的不断改进 SSCP技术自创立以来,经历了自身发展和完善的过程,刚建立时是将同位素掺入PCR 扩增物中,通过放射自显影来显示结果.这给该技术的推广造成一定的困难,随着DNA ...