细胞传代是细胞培养技术中最基础也是最重要的环节,是细胞实验开展的必备技能,好的细胞传代技术不仅能实现理想的实验结果,同时也可以节约时间和实验成本。 1. 什么是传代培养? 传代又称继代培养,是指去除培养基并将细胞从原培养物转移到新鲜的生长培养基中,通过这一操作使细胞进一步繁殖。传代培养的时间与细胞增殖的特...
培养容器(培养瓶、培养板、培养皿)的规格型号,细胞数以Hela细胞为例,如表所示: 二、贴壁细胞传代步骤 1. 准备工作 观察细胞:在显微镜下检查细胞生长状况,确保细胞达到适合的汇合度(通常为70~90%)。 将细胞完全培养基和胰蛋白酶-EDTA(质量体积比为0.25%的胰蛋白酶+0.53mmol/L的EDTA)放入37℃水浴中加热约15min。
从培养箱取出细胞,在显微镜下观察其状态,判断是否达到传代密度。 将超净台及耗材用紫外线消毒 30 分钟,预热胰酶、PBS、完全培养基至 37℃。 消毒结束后,将细胞放入超净台,吸去培养基,加入 2ml PBS 润洗,轻轻冲洗贴壁细胞,然后晃动润洗。 向培养基中加入预热后的胰酶,使其覆盖细胞层,轻轻晃动培养瓶使胰酶浸润细胞。
细胞传代培养是细胞培养的常规方法之一,当细胞随着培养时间的延长和细胞分裂时,细胞之间会发生接触和接触,生长速度减慢甚至停止,并且也会因营养不足和代谢产物的积累而不利于细胞生长或中毒。因此,一旦细胞在培养瓶中长满,就需要稀释并接种到多个培养瓶中,细胞才能继续生长。 细胞传代目的不仅可以扩大细胞培养数量,还可以...
2、细胞复苏 注意:细胞从液氮拿出来之后一定要迅速解冻。 3、细胞传代 当培养细胞增殖达到一定密度(70%-80%)后,将会出现密度抑制现象,表现为细胞的生长和分裂速度逐渐减慢,甚至停止。贴壁细胞会在培养瓶中长成致密单层(悬浮细胞会充满整个体积的培养液),并铺满培养瓶底部,如果不及时进行分瓶处理,细胞将会逐渐走向...
（3）培养：原代细胞的培养方法分为组织块培养法、消化培养法、悬浮细胞培养法和器官培养。前两种是最简单、常用、成功率高的方法。根据不同分离方法取得的细胞接种到培养瓶后，放置于37℃ CO2培养箱中培养。图2 小鼠原代乳腺上皮细胞在不同培养基中的培养状态（Alamri et al., 2016）。02 传代培养操作步骤 2....
细胞传代步骤 一、贴壁细胞：以HeLa细胞的传代培养为例 1. 选取生长密度 80%左右即处于生长对数期的HeLa细胞，在超净工作台中操作，吸去培养皿中的旧培养基，加入1-2 mL的PBS溶液，轻轻润洗，漂洗细胞以除去残留的血清。2. 吸去培养皿中的PBS溶液，加入1-2 mL 0.25%胰蛋白酶消化液（消化液能够覆盖细胞即可...
仪器:CO₂培养箱,显微镜,超净台,离心机 实验步骤 步骤一 1.从培养箱取出细胞,镜下观察细胞状态,并判断是否达到了可传代的细胞密度。 步骤二 2.将超净台和所需耗材紫外照射灭菌30min。37℃水浴预热胰酶、PBS缓冲液、完全培养基。 步骤三 3.紫外结束...
一、贴壁细胞:以HeLa细胞的传代培养为例 1. 选取生长密度 80%左右即处于生长对数期的HeLa细胞,在超净工作台中操作,吸去培养皿中的旧培养基,加入1-2 mL的PBS溶液,轻轻润洗,漂洗细胞以除去残留的血清。 2. 吸去培养皿中的PBS溶液,加入1-2 mL 0.25%胰蛋白酶...