细胞培养的具体步骤可分为:细胞复苏、细胞传代、细胞冻存 一、细胞复苏 1. 细胞复苏的原则:快速融化 在复苏细胞时必须遵循快速融化的原则,即必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至 37 ℃,因为这样可使冻存时细胞外的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。 2. 细胞复苏操作过程 ...
1)分离取得的原代细胞用PBS洗涤,1000rpm 离心5min,洗涤两次,然后加入适量培养基,37℃,5% CO₂孵箱培养。 2) 原代细胞培养所需的耗材如培养瓶、离心管(NUNC)最好使用一次性的。 2、细胞株培养与传代 1) 贴壁细胞培养传代:贴壁细胞先弃去旧培养基,在消化前先用PBS在培养器皿中洗涤1次,尽量弃去PBS后加入适量...
在细胞培养中,常见的术语有原代培养、传代培养、冻存和复苏。 原代培养 原代培养是将从组织中分离出的细胞直接进行培养,即首次培养。通常将组织切割成小段或分散成单细胞悬液,加入培养基中,使其中的细胞粘附在培养基表面上生长。原代培养中所得细胞经常受到组织来源、细胞类型和培养条件等因素的影响,因此可能表现出...
9. 将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。 10. 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要时计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。 11. 继续培养:用...
1. 待细胞生长至可传代的密度，即可准备冻存。2. 消化细胞，取少量细胞悬液计数。细胞悬液经250 g离心4 min。3. 离心后去除上清，用适量4℃预冷的冻存液重悬细胞。将细胞按比例或数量分装至冻存管中。一般冻存密度为(1.0~2.0)×106个/mL。注意: 细胞长时间在非培养条件下放置会严重影响细胞的状态。如...
细胞原代培养、传代培养、冻存和复苏 细胞原代培养、传代培养、冻存和复苏 1实验原理 细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养...
细胞培养:模拟体内的生理环境,在无菌、适宜温度和一定的营养条件下,使离体细胞生存、生长并维持结构和功能的一门技术。包括细胞传代、换液、冻存、复苏几个操作...
在此以贴壁细胞为例:(细胞传代、冻存、铺板前边步骤基本一样) 1.弃去培养皿中原有培养基,并用PBS清洗2-3遍; 2.加入适量胰酶消化,根据细胞种类不同,选择不同消化时间,一般消化2-3分钟; 3.充分拍打使细胞尽可能脱壁,显微镜下观察细胞变为圆形、透亮,加入等体积的培养基终止消化,用移液枪充分吹打细胞,使细胞充...
实验一:细胞传代培养 材料: 15ml离心管、枪(头1ml、200ul、10ul)、无菌吸管、培养瓶、含10%FBS的RPMI—1640(OVCAR-3)、M5A(SKOV-3)、PBS、trypsin等 1、步骤:(以下均在超净台内,酒精灯旁操作)(SKOV-3) 2、打开超净台,将离心管、枪(头)、吸管等工具置于紫外线下照射30min;含10%FBS的RPMI—1640、tr...
1、实验三实验三细胞的传代培养及冻存细胞的传代培养及冻存实验目的实验目的1.掌握细胞传代培养的方法掌握细胞传代培养的方法2.掌握细胞冻存的方法掌握细胞冻存的方法3.建立严格的无菌操作观念建立严格的无菌操作观念实验原理实验原理 传代培养是组织培养常规保种方法之一,也是传代培养是组织培养常规保种方法之一,也是...