细胞培养的具体步骤可分为:细胞复苏、细胞传代、细胞冻存 一、细胞复苏 1. 细胞复苏的原则:快速融化 在复苏细胞时必须遵循快速融化的原则,即必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至 37 ℃,因为这样可使冻存时细胞外的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。 2. 细胞复苏操作过程 ...
8. 弃去上清液,加入适当体积的培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。 9. 将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。 10. 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要时计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,...
1、实验三实验三细胞的传代培养及冻存细胞的传代培养及冻存实验目的实验目的1.掌握细胞传代培养的方法掌握细胞传代培养的方法2.掌握细胞冻存的方法掌握细胞冻存的方法3.建立严格的无菌操作观念建立严格的无菌操作观念实验原理实验原理 传代培养是组织培养常规保种方法之一,也是传代培养是组织培养常规保种方法之一,也是...
将细胞悬液转移至两管离心管内,一半细胞用于传代,一半细胞用于冻存 将离心管放入离心机内,设置1000rpm,5min离心 加入5ml左右完全培养基待用 离心结束后,得到沉淀后的细胞 去上清,加入2ml左右完全培养基重悬细胞 用移液枪轻轻地吹散细胞,以确保单一细胞的均匀溶液 用细胞悬液装入培养皿中,将培养皿前后左右各晃动数...
细胞冻存 1. 待细胞生长至可传代的密度，即可准备冻存。2. 消化细胞，取少量细胞悬液计数。细胞悬液经250 g离心4 min。3. 离心后去除上清，用适量4℃预冷的冻存液重悬细胞。将细胞按比例或数量分装至冻存管中。一般冻存密度为(1.0~2.0)×106个/mL。注意: 细胞长时间在非培养条件下放置会严重影响细胞...
2) 悬浮细胞培养传代:移液管吹打细胞收集到离心管中,若是悬浮细胞吹打重悬后移入离心管(无胰酶消化步骤),1000rpm 室温离心5min,弃去上清,加入适量培养基重悬,细胞计数后吸取所需细胞到培养器皿,补加培养基,37℃,5% CO₂孵箱培养。 四、细胞冻存与复苏 ...
细胞培养已成为生命科学和医学研究中不可或缺的基础工具。在细胞培养中,常见的术语有原代培养、传代培养、冻存和复苏。 原代培养 原代培养是将从组织中分离出的细胞直接进行培养,即首次培养。通常将组织切割成小段或分散成单细胞悬液,加入培养基中,使其中的细胞粘附在培养基表面上生长。原代培养中所得细胞经常受到...
细胞培养: 模拟体内的生理环境,在无菌、适宜温度和一定的营养条件下,使离体细胞生存、生长并维持结构和功能的一门技术。包括细胞传代、换液、冻存、复苏几个操作。 细胞传代: 体内细胞生长在动态平衡环境中,培养细胞的生存环境是平皿等容器,生存空间和营养是有限的,当细胞增殖达到一定密度后,需要分离出一部分细胞和...
2、细胞复苏：①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存。①弃去培养上清，用PBS或盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰...
1、细胞原代培养、传代培养、冻存与复苏1实验原理细胞培养可分为原代培养与传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养, 即将培养的细胞分散后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养,传代培养的累积次数就是...