1.按照细胞传代步骤1-7操作制备细胞悬液并离心; 2. 弃去上清,加入适当体积的冻存液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液; 3. 将1 ml细胞悬液加入加入之前已做好标记的冻存管中并做好记录; 4. 将冻存管放入梯度冻存盒然后保存至-80℃...
(2) 程序降温盒 是一般最广泛使用的降温法,为一种特制冷冻容器(填充异丙醇或依靠特制金属导热),使细胞以每分钟约-1℃的速度降至-80℃(过夜),然后移至液氮中保存。 (3) 免液氮程序降温仪 一种新型自动化程序降温方法,通过微处理器精确控制冷却速率和样品温度,能够控制样品线性/非线性降温,能够有效减少冻融过程...
1.根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的对应编号。 2.从液氮罐中取出细胞盒,取出所需的细胞,同时核对管外的编号。 迅速解冻 1.迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻,并要不断地摇动,使管中的液体迅速融化。 2.约1-2min后冻存管内液体完全溶解,取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁,再拿入超净台内。
1.从液氮容器中取出冻存管,直接浸入37℃温水中,并不时摇动令其尽快融化。 2. 从37℃水浴中取出冻存管,打开盖子,用吸管吸出细胞悬液,加到离心管并滴加10倍以上培养液,混匀; 3. 离心, 1000rpm,5min; 4. 弃去上清液,加入含10%小牛血清培养液重悬细胞,计数,调整细胞密度,接种培养瓶,37℃培养箱静置培养; ...
复苏开始 1.准备好培养皿(9cm皿)放入8-9ml培养基 2.将冻存管从液氮或-80冰箱取出,放在37度水浴锅中,一分钟速溶,期间手一直在晃动震荡 3.身边人复苏有好几种方法,我总结了一下 a.将解冻的细胞直接吸取加入培养基中,放进培养箱 b.将解冻的细胞直接1000rpm3-5min离心,枪吸走上清,重悬加入培养基中 ...
1. 待细胞生长至可传代的密度，即可准备冻存。2. 消化细胞，取少量细胞悬液计数。细胞悬液经250 g离心4 min。3. 离心后去除上清，用适量4℃预冷的冻存液重悬细胞。将细胞按比例或数量分装至冻存管中。一般冻存密度为(1.0~2.0)×106个/mL。注意: 细胞长时间在非培养条件下放置会严重影响细胞的状态。如...
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代。①弃去培养上清，用PBS或盐水清洗1-2次；②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱...
在此以贴壁细胞为例:(细胞传代、冻存、铺板前边步骤基本一样) 1.弃去培养皿中原有培养基,并用PBS清洗2-3遍; 2.加入适量胰酶消化,根据细胞种类不同,选择不同消化时间,一般消化2-3分钟; 3.充分拍打使细胞尽可能脱壁,显微镜下观察细胞变为圆形、透亮,加入等体积的培养基终止消化,用移液枪充分吹打细胞,使细胞充...
传代培养,准备及注意事项 换液传代冻存复苏 MTT,4,准备事项,紫外灯照射细胞室30分钟,风机运行10分钟后方可进入实验室. 穿专用的口罩,帽子,拖鞋,工作衣等. 带手套,并用酒精擦拭之. 准备好实验必需用品. 超净工作台内操作前用酒精棉球擦拭台面. 超净工作台内操作完成后, 要用酒精棉球擦拭台面,除了酒精灯,镊子,...