细胞培养的具体步骤可分为:细胞复苏、细胞传代、细胞冻存 一、细胞复苏 1. 细胞复苏的原则:快速融化 在复苏细胞时必须遵循快速融化的原则,即必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至 37 ℃,因为这样可使冻存时细胞外的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。 2. 细胞复苏操作过程 ...
并且一次复苏细胞过多,容易忘记更换吸头和吸管,导致细胞交叉污染。细胞生物学研究中,为了更好而长期地研究细胞生物学功能,需要将良好状态的细胞保存起来,以备将来使用。 冻存成功的两大必要条件 细胞的生长状态 按照标准冻存程序操作 为什冻存细胞需要加入保护剂 在不附加任何保护剂下直接冻存细胞时,细胞内和外环境...
(1)如果是对冻存液成分耐受的细胞,可将冻存管中的细胞直接吸入准备好的培养瓶/皿, 轻轻十字摇晃混匀细胞,放入细胞培养箱。 (2)如果是对冻存液成分不耐受的细胞,将冻存管中的细胞吸入准备好的 15ml 离心管中,500g ×3min 离心,去除上清,1ml-2ml 预热的完全培养...
细胞复苏指的是从冻存状态下恢复细胞的生长和功能,传代是将细胞进行繁殖,冻存则是将细胞保存在极低温下,以便长期保存和后续使用。下面将详细讨论这些过程。 细胞复苏 材料和设备 •冻存管:包含冻存细胞的管子 •暖水槽:设置在37°C的恒温水槽内 •柱塞:用于搅动和混合细胞悬液 •无菌培养皿 •无菌培养...
细胞冻存、复苏及传代 细胞冻存步骤 1、将细胞冻存液(10%DMSO+90%FBS)配好并放置冰箱预冷; 2、 当 10 cm 培养皿中的 RBMSC 细胞汇合到 80%-90%时, 用胰蛋白酶将细胞消化下来, 1200 rpm 离心,去上清; 3、加入 PBS 重悬细胞,以洗去残留的胰蛋白酶,1200 rpm 离心,去上清; 4、加入 1ml 细胞冻...
Q:细胞冻存时对细胞量有要求吗? A:细胞复苏时会有一定的细胞死亡,因此细胞的浓度应足够高,起始浓度106—107个/ml/管; 四、细胞的传代培养 细胞传代:细胞在培养过程中不断增殖,培养皿/瓶空间有限,当细胞接触过密,生长就会受到抑制,影响细胞状态,因此我们要把其中一部分细胞分到别的培养皿/瓶里。
细胞传代、冻存与复苏 细胞培养的基本概念 传代： 细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分开接种到新的培养器皿中。原代培养取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。 原代培养细胞的生命归宿 原代培养期传代期衰退期 有限细胞系，无限...
1细胞复苏细胞复苏:将冻存在-80℃或液氮的细胞解冻,重新恢复其生长的过程操作原则:快!实验步骤:提前预热培养基,准备好细胞培养皿、离心管,在管中加入2ml预热的培养基解冻细胞:从-80℃或液氮中取出细胞,直接放入37℃水浴锅中,边摇边解冻,大约5min,注意冻存管...
细胞冻存、复苏及传代细胞冻存步骤 1、将细胞冻存液(10%DMSO+90%FBS)配好并放置冰箱预冷; 2、当10 cm培养皿中的RBMSC细胞汇合到80%-90%时,用胰蛋白酶将细胞消化下来,1200 rpm离心,去上清; 3、加入PBS重悬细胞,以洗去残留的胰蛋白酶,1200 rpm离心,去上清; 4、加入1ml细胞冻存液重悬后,将细胞重悬液...
细胞冻存 1. 待细胞生长至可传代的密度，即可准备冻存。2. 消化细胞，取少量细胞悬液计数。细胞悬液经250 g离心4 min。3. 离心后去除上清，用适量4℃预冷的冻存液重悬细胞。将细胞按比例或数量分装至冻存管中。一般冻存密度为(1.0~2.0)×106个/mL。注意: 细胞长时间在非培养条件下放置会严重影响细胞...