细胞复苏 1.水浴锅预热至37℃。-80℃冰箱中取出冻存细胞,37℃水浴下快速融化(1分钟左右为宜)。 2.准备:培养基、1ml灭菌枪头、25T细胞瓶或六孔板等,与细胞瓶一同经酒精喷雾消毒后置入超净台。 3.吸取细胞悬液至15ml离心管中。1200rpm下室温离心5分钟。期间,新的25T细胞瓶中加入4ml培养基。 4.弃上清,尽量...
细胞复苏:从液氮中取出冻存管,于37℃水浴锅中至冰晶溶解,冻存管中的液体转移至离心管,离心后,弃上清,加入完全培养基吹打混匀后,转移至培养瓶,于培养箱内培养。 细胞传代:PBS清洗,胰蛋白酶消化,完全培养基终止消化,离心机离心,留1/3的细胞混合液转移至培养瓶内,于培养箱内培养 细胞冻存:重悬得到细胞液,取1.5...
在细胞培养中,常见的术语有原代培养、传代培养、冻存和复苏。 原代培养 原代培养是将从组织中分离出的细胞直接进行培养,即首次培养。通常将组织切割成小段或分散成单细胞悬液,加入培养基中,使其中的细胞粘附在培养基表面上生长。原代培养中所得细胞经常受到组织来源、细胞类型和培养条件等因素的影响,因此可能表现出...
1. 按照细胞传代步骤1-7操作制备细胞悬液并离心; 2. 弃去上清,加入适当体积的冻存液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液; 3. 将1 ml细胞悬液(细胞的终密度为5~10×105个/ml)加入之前已做好标记的冻存管中并做好记录; 4. 将冻存管放入梯度冻存盒然后保存至-80℃过夜(如果没有冻存盒,可以先在4℃冰箱放...
细胞复苏的原则-快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。 具体操作: 一. 实验前准备: 1. 将水浴锅预热至37℃ 2. 用75%酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。
细胞复苏的原则-快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。 具体操作: 一. 实验前准备: 1. 将水浴锅预热至37℃ 2. 用75%酒精擦拭紫...
1)按照“细胞传代步骤”中的方法收集细胞。 2)加入细胞冻存液(一般10%DMSO+对应细胞的*培养液),使细胞的终密度为(5~10)×105个/ml,移入细胞冻存管中。 3)程序降温(以使用需异丙醇的Nalgene程序降温盒为例):4℃ 30min→-80℃过夜→液氮。(一定不能省略4℃的30min,否则冻存液无法渗透到细胞,易产生冰晶...
(1)准备适量冻存管,做好标记后置于 4℃冰箱预冷; (2) 配制冻存液,一般为用培养液配制 10% DMSO; (3)梯度冻存盒。 2.2 细胞冻存 (1) 按照细胞传代步骤 1-7 操作制备细胞悬液并离心; (2)弃去上清,加入适当体积的冻存液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬 液; (3)将 1 mL 细胞悬液加入加入之前已做...
复苏: 复苏是指冻存的细胞被解冻、恢复生长和增殖的过程。具体步骤如下: 1.细胞解冻:将冻存的细胞管迅速取出,直接放入37摄氏度的水浴中,轻轻摇动直至融化。 2.加热离心:将解冻的细胞液转移到新的离心管中,离心5分钟。去除上清液后,加入预暖的培养基轻轻悬浮细胞。 3.细胞计数与铺板:将悬浮的细胞进行计数,根据...
细胞原代培养、传代培养、冻存和复苏 细胞原代培养、传代培养、冻存和复苏 1实验原理 细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养,即将培养的细胞分散后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养...