3开超净台点燃酒精灯燃烧片刻后可提前准备冻存管放超净台换新手套小心打开冻存管避免污染无菌吸管将1ml细胞全部吸出至5ml无菌ep管补加9ml基础培养基稀释1000rpm离心5min使细胞沉淀弃上清 步骤不能再精细!细胞复苏、传代及冻存 细胞复苏、传代及冻存实验步骤: 一 复苏 传代 ( 1) 准备 无菌超净台,酒精灯,75...
(1)如果是对冻存液成分耐受的细胞,可将冻存管中的细胞直接吸入准备好的培养瓶/皿, 轻轻十字摇晃混匀细胞,放入细胞培养箱。 (2)如果是对冻存液成分不耐受的细胞,将冻存管中的细胞吸入准备好的 15ml 离心管中,500g ×3min 离心,去除上清,1ml-2ml 预热的完全培养...
1.根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的对应编号。 2.从液氮罐中取出细胞盒,取出所需的细胞,同时核对管外的编号。 迅速解冻 1.迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻,并要不断地摇动,使管中的液体迅速融化。 2.约1-2min后冻存管内液体完全溶解,取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁,再拿入超净台内。
复苏: 复苏是指冻存的细胞被解冻、恢复生长和增殖的过程。具体步骤如下: 1.细胞解冻:将冻存的细胞管迅速取出,直接放入37摄氏度的水浴中,轻轻摇动直至融化。 2.加热离心:将解冻的细胞液转移到新的离心管中,离心5分钟。去除上清液后,加入预暖的培养基轻轻悬浮细胞。 3.细胞计数与铺板:将悬浮的细胞进行计数,根据...
细胞冻存 1. 待细胞生长至可传代的密度,即可准备冻存。2. 消化细胞,取少量细胞悬液计数。细胞悬液经250 g离心4 min。3. 离心后去除上清,用适量4℃预冷的冻存液重悬细胞。将细胞按比例或数量分装至冻存管中。一般冻存密度为(1.0~2.0)×106个/mL。注意: 细胞长时间在非培养条件下放置会严重影响细胞...
1.将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。 2.在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。 三、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 1.弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ...
1、 细胞复苏、传代、冻存步骤1、 所需仪器:离心机生物安全柜电动移液器CO2培养箱倒置显微镜液氮罐恒温水浴锅-86超低温冰箱2、 所需试剂:胎牛血清(FBS)无菌1×PBS pH=7.2完全培养基消化液:0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA完全培养基(含血清)细胞培养级DMSO冻存液:80%FBS+20%DMSO无菌1×PBS pH=7.2消化液:0.25%胰...
11.细胞传代 一旦细胞复苏并正常生长,可以进行细胞传代以扩增细胞数量。细胞传代是将细胞分离并移植到新的培养皿中,以保持细胞的健康和生长。 以上是细胞传代冻存复苏的基本步骤,整个过程需要严格控制各个步骤的操作和条件,以确保细胞的质量和生存率。细胞冻存是一项重要的技术,在细胞研究和医学应用中具有广泛的应用价值...
六 复苏 1、准备工作:开启恒温水浴锅,将温度调节在37℃,取一离心管,加入5ml细胞培养基. 2、取出冻存管,立即放入水浴锅中快速摇晃,让冻存液迅速融化。 3、用酒精棉球擦洗冻存管外部以降低污染机会. 4、打开冻存管,将冻存液小心转移到预先加入有培养基的离心管中,800rpm离心5分钟。 5、小心弃掉上清,加入约...