Tn5转座原理 1、转座开始时,两个Tnp识别结合Tn5转座子两端的OE序列,形成Tnp-OE复合物,然后两个Tnp-OE复合物相互结合,两Tnp的C端介导互作并形成具有切割DNA能力的二聚体突触复合物。 2、Tnp活化附近水分子(Mg2+介导),活化水分子在转座子5端水解DNA的一条链并形成3’-OH亲核基团,3’-OH进一步攻击互补链形成发...
传统建库方式需要经过DNA片段化、末端修复、接头连接、文库扩增、多次纯化分选等步骤,耗时较长,将Tn5用于测序文库构建时,可将DNA片段化、末端修复、接头连接等多步反应转变为1步反应,极大缩短建库时间,提高工作效率。 研究发现,Tn5转座酶可以仅识别OE序列并将其随机插入DNA中,完成体外的转座。根据这一原理,将测序的P5...
转座酶复合体是由两分子的Tn5转座酶加两端DNA序列，具体情况见下图：图3.Tn5转座酶结构转座酶复合体组合后，我们就可以进行文库构建了，Tn5转座复合体进行“剪切-复制”的过程中，会在靶DNA处产生一个9bp的gap，在文库构建的PCR阶段，需要先进行72℃的延申步骤来补平gap，具体步骤见下图：图4.Tn5文库构建流程大家...
Tn5转座子结构 Tn5转座子序列包含四个重要组分: 1) IS50 IS50R上面的Tnp和Inh分别编码转座酶(Tnp)和转座抑制因子(Inh),Inh可与Tnp形成多聚体复合物进而抑制Tnp介导的转座;IS50L上面的P3和P4分别编码Tnp和Inh的无功能形式。 2) Outside end(OE)sequences ...
在 ISSAAC-seq中，首先使用带有通用Nextera接头的Tn5转座酶（R1，R2）插入标记染色质开放区域，这种带有通用Nextera接头的Tn5转座酶常用于典型的scATAC-seq实验；随后添加一段引物（这段引物包含部分的Truseq接头R2序列、10 bp的UMI分子标签，以及poly-T序列）用于核内的逆转录反应；随后，使用一侧包载有Nextera接头R1...
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本文主要介绍基于Tn5转座酶的方法 转座酶通过形成二聚体转座酶、转座子 DNA 复合物启动转座。在该复合物中,转座酶催化四个磷酸转移反应(DNA 挑刺、DNA 发夹形成、发夹分解和链转移到目标 DNA),从而将转座子整合到新的 DNA 位点。 image.png 下面从文献中挖掘信息,旨在明确Tn5转座子 ...
tn5转座酶在基因组测序中的应用。基因组测序是联合多组学研究的基础,可以揭示生物体的基因组结构和序列信息。tn5转座酶可用于将DNA片段随机插入到待测序的基因组中,从而构建测序文库。与传统文库构建方法相比,tn5转座酶具有高效、快速和无需特定引物的特点,大大简化了实验操作流程。此外,tn5转座酶还可用于建立谱系追踪模...
tn5转座子是一种广泛存在于细菌和真核生物中的转座子,它可以在基因组中发生自由或复制式的转座反应。 2.2 tn5转座子的结构与功能 tn5转座子由两个关键部分组成:外翻酶(transposase)基因和IRs(inverted repeats)序列。外翻酶是负责催化DNA切割和连接的酶,IRs序列则是在转座反应过程中提供结构支持和识别特定位点的...