1、荧光染料法（SYBR Green）：SYBR Green Ⅰ是荧光定量PCR中最常用的荧光染料，它能与所有的双链DNA...
试剂添加量终浓度蒸馏水16μl SYBRGreenRealtimePCRMasterMix25μl1x上游引物(10μM)2μl0.4μM下游引物(10μM)2μl0.4μM待测样品cDNA5μl Totalvolume50μl 将SYBRGreenRealtimePCRMasterMix设定为反应体系的1/2,其他的组成成份请参照最适条件进行调整。如需改变反应体系的总体积,其他组成成份也应按相同比...
染料法一般使用的是SYBR Green I染料,这是一种可以与双链DNA小沟结合的荧光染料,其不会与单链DNA结合,且在游离状态下几乎无荧光,只有与双链DNA结合才会发出荧光,因此将PCR扩增产生的双链DNA数量与荧光强度直接关联,产生实时监测的效果。 SYBR Green染料法优点 ☑ 通用性好,适合进行大多数类型的定量反应,可以进行...
由于SYBR Green染料可与所有的双链DNA结合,因此荧光强度也会随着PCR产物的增加而增加。 图1 SYBR Green 染料法实验原理示意图(https://www.thermofisher.cn/cn/zh/home/life-science/pcr/real-time-pcr/real-time-pcr-learning-center/real-time-pcr-basics/taqman-vs-sybr-chemistry-real-time-pcr.html#compare...
Table 1 RT-qPCR一步法和两步法比较 AllStart®/ATG® HSOne Step RT-qPCR SYBR Green Kit (ATG #R305 & ATG #R405) 基于 SYBR Green I 嵌合荧光法,针对以RNA为模板 (如RNA类病毒) 的荧光定量PCR快速检测设计,结合使用基因特异性引物,可使逆转录和qPCR反应在一管内完成,无需额外操作,降低污染的风险...
摘要:为建立检测猫麻疹病毒(FeMV)敏感、特异且快速的方法,本研究根据FeMV的L基因保守区设计引物,通过反应条件的优化,建立了快速检测FeMV的SYBR Green I 荧光定量RT-PCR 方法。以质粒标准品pMD19t-FeMV-L为模板,结果显示该方法最低检测下线是30拷贝/ μL,是常规RT-PCR 方法的100倍。组内和组间的重复性试验显...
以下是sybr green染料法的引物设计原则: 一、引物长度 1. 引物长度一般在18-24个碱基对之间。过长的引物可能使PCR反应失败,而过短的引物可能导致非特异性扩增。 二、引物Tm值 2. 引物的Tm值应该尽量接近。Tm值的计算可以通过一些软件如OligoCalc或Primer3进行预测。Tm值的差异过大可能会导致引物的不对称性,从而...
在qPCR技术中，TaqMan探针法和SYBR Green染色法是两种广泛应用的方法。TaqMan探针法通过特异性探针识别目标序列，具有较高的特异性和准确性。而SYBR Green染色法则通过荧光染料标记双链DNA，具有操作简便的优势。尽管SYBR Green染色法在操作上较为简单，但在特异性上不如TaqMan探针法。这是因为SYBR Green染色...
Sybr Green法的实验策略：实验可分为三个阶段，即实验条件的优化、预实验和正式实验。一、 实验条件的优化阶段，这一阶段是最花时间的，1、 要找到一个阳性的模板，可以是克隆有基因质粒、强阳性样本或纯化的PCR产物等。有了阳性的模板才能进行最基本的定量扩增实验，如果有普通PCR的实验条件，也可以此为基础进行...
SYBR Green染色方法