1.专一性要求不高的实验:如果实验对扩增产物的专一性要求不高,可以选择SYBR Green I法,利用其操作简便、成本低廉的优势。2.大规模高通量的实验:在大规模高通量的实验中,由于SYBR Green I法操作简单、成本低廉,适合快速、大量的样本检测。3.初步筛选实验:在科研或诊断中,可以使用SYBR Green I法进行初步筛选...
【SYBR Green I法引物设计要点】在运用SYBR Green I染料法进行qPCR实验时,引物设计相较于普通PCR扩增引物,需要额外注意以下几个关键原则:1、在运用SYBR Green I染料法进行qPCR实验时,首要原则是选择具有高度特异性的引物对,以确保扩增产物不会形成二级结构。2、扩增的熔解温度(Tm)应控制在约60℃,因为这是SYB...
避开保守区域:如果研究的是多物种或存在基因家族成员,应尽量避开高度保守的区域,以减少非特异性扩增的可能性。靠近3' 端:引物设计的位置尽量靠近基因的3' 端,可提高扩增效率。考虑跨内含子或外显子:若以基因组DNA 为模板,可选择跨越内含子的区域设计引物;当研究mRNA 表达时,可选择跨越外显子边界的区域设计...
qPCR小课堂之SY..qPCR染料法的原理qPCR染料法在体系中额外加入了非特异性双链DNA荧光染料(通常为SYBR Green I),游离的荧光染料本身不发光或只发出极弱的荧光信号,但染料可以非特异地结合在双链DNA小沟
qPCR染料法在体系中额外加入了非特异性双链DNA荧光染料(通常为SYBR Green I),游离的荧光染料本身不发光或只发出极弱的荧光信号,但染料可以非特异地结合在双链DNA小沟上,并发出较强的荧光信号。随着PCR循环数的增加,越来越多的染料与双链DNA结合,产生的荧光量与双链DNA含量成正比。因此可以通过检测qPCR体系中的荧光...
1、 DNA结合染料—SYBR Green I 法 • 原理:SYBR Green I 是一种DNA结合染料,其与双链DNA结合后,荧光大大增强,DNA与染料结合所释放的荧光量与dsDNA的数量成正比。因此,检测到的荧光信号可反映出PCR体系存在的双链DNA数量。 • 特征:可逆荧光,最大吸收波长497nm,最大发射波长520nm。
荧光定量qPCR预混体系-SYBR Green I染料法 货号 QP-03011 规格 500 × 20 μL rxns 价格 ¥990.00 描 述使用SYBR Green I进行Real Time PCR扩增反应,采用全新FOREGENE HS Taq酶,能大幅度提高产物特异性和反应灵敏度,荧光强度为同类产品的3-5倍。
1、 DNA结合染料—SYBR Green I 法 • 原理:SYBR Green I 是一种DNA结合染料,其与双链DNA结合后,荧光大大增强,DNA与染料结合所释放的荧光量与dsDNA的数量成正比。因此,检测到的荧光信号可反映出PCR体系存在的双链DNA数量。 • 特征:可逆荧光,最大吸收波长497nm,最大发射波长520nm。
SYBRGreenI荧光染料法解析 SYBRGreenI荧光染料法解析 SYBR Green I⽅法是⽬前最为常见的荧光染料,其作⽤原理为:SYBR Green I是⼀种只与双链DNA⼩沟结合的染料,并不与单链DNA链结合,⽽且在游离状态不发出荧光,只有掺⼊DNA双链中才可以发光,因此,在PCR体系中,随着特异性PCR产物的指数扩增,...
在sybr green染料法中,引物的设计对实验结果有着直接的影响。为了保证PCR反应的准确性和稳定性,引物的设计是至关重要的。以下是sybr green染料法的引物设计原则: 一、引物长度 1. 引物长度一般在18-24个碱基对之间。过长的引物可能使PCR反应失败,而过短的引物可能导致非特异性扩增。 二、引物Tm值 2. 引物的Tm...