1、 DNA结合染料—SYBR Green I 法 • 原理:SYBR Green I 是一种DNA结合染料,其与双链DNA结合后,荧光大大增强,DNA与染料结合所释放的荧光量与dsDNA的数量成正比。因此,检测到的荧光信号可反映出PCR体系存在的双链DNA数量。 • 特征:可逆荧光,最大吸收波长497nm,最大发射波长520nm。 • 适用情况:非特异...
一.SYBR Green I法原理 1.Sybr Green I是一种结合于小沟中的双链DNA结合染料,在PCR反应体系中,Sybr荧光染料特异性地掺入DNA双链与双链DNA结合后,发射荧光信号,而不掺入双链中的Sybr染料分子不会发射任何荧光信号。从而保证与PCR产物的增加完全同步。 2.利用荧光染料可以指示双链DNA熔点的性质,通过熔点曲线分析...
qPCR染料法在体系中额外加入了非特异性双链DNA荧光染料(通常为SYBR Green I),游离的荧光染料本身不发光或只发出极弱的荧光信号,但染料可以非特异地结合在双链DNA小沟上,并发出较强的荧光信号。随着PCR循环数的增加,越来越多的染料与双链DNA结合,产生的荧光量与双链DNA含量成正比。因此可以通过检测qPCR体系中的荧光...
SYBR Green I方法是目前最为常见的荧光染料,其作用原理为:SYBR Green I是一种只与双链DNA小沟结合的染料,并不与单链DNA链结合,而且在游离状态不发出荧光,只有掺入DNA双链中才可以发光,因此,在PCR体系中,随着特异性PCR产物的指数扩增,每个循环的延伸阶段,染料掺入双链DNA中,其荧光信号强度与PCR产物的数量呈正相...
SYBR Green I染料法的工作原理【实验代做】1、SYBR Green I染料试剂一般将可与双链DNA发生结合的小分子分为以下两类:1)嵌入剂2)小沟结合物无论哪种结合方法,用于PCR实时检测的DNA结合染料都需要满足以下两个条件:1)结合至双链DNA时,会有增强的荧光2)对 PCR 不会产生抑制3)我们开发更加优化的条件,使得SYBR ...
在SYBR Green I 染料法中用于确定PCR产物的特异性,当PCR反应结束时,从50℃一直加热到95℃,在此过程中PCR产物按照Tm值的大小双链被依次打开,荧光强度也随着双链的打开依次减弱,从而得到溶解曲线。 融解曲线为单峰则证明PCR反应没有出现非特异性产物。 实验方案的优化 Mg2+的浓度 Mg2+的浓度是影响Taq酶活性的关键...
在设计引物时,使用SYBR Green I 染料需要遵循一定的原则,以确保PCR实验的准确性和可靠性。本文将为你介绍SYBR Green I 染料法设计引物的原则。 1. 引物长度 在设计引物时,需要考虑引物的长度。一般来说,引物的长度应该在18到25个碱基对之间。引物过短可能导致特异性不足,引物过长则可能导致PCR效率下降。合适的...
一.SYBR Green I法原理 1.Sybr Green I是一种结合于小沟中的双链DNA结合染料,在PCR反应体系中,Sybr荧光染料特异性地掺入DNA双链与双链DNA结合后,发射荧光信号,而不掺入双链中的Sybr染料分子不会发射任何荧光信号。从而保证与PCR产物的增加完全同步。
在sybr green染料法中,引物的设计对实验结果有着直接的影响。为了保证PCR反应的准确性和稳定性,引物的设计是至关重要的。以下是sybr green染料法的引物设计原则: 一、引物长度 1. 引物长度一般在18-24个碱基对之间。过长的引物可能使PCR反应失败,而过短的引物可能导致非特异性扩增。 二、引物Tm值 2. 引物的Tm...