1、荧光染料法（SYBR Green）：SYBR Green Ⅰ是荧光定量PCR中最常用的荧光染料，它能与所有的双链DNA...
染料法一般使用的是SYBR Green I染料,这是一种可以与双链DNA小沟结合的荧光染料,其不会与单链DNA结合,且在游离状态下几乎无荧光,只有与双链DNA结合才会发出荧光,因此将PCR扩增产生的双链DNA数量与荧光强度直接关联,产生实时监测的效果。 SYBR Green染料法优点 ☑ 通用性好,适合进行大多数类型的定量反应,可以进行...
由于SYBR Green染料可与所有的双链DNA结合,因此荧光强度也会随着PCR产物的增加而增加。 图1 SYBR Green 染料法实验原理示意图(https://www.thermofisher.cn/cn/zh/home/life-science/pcr/real-time-pcr/real-time-pcr-learning-center/real-time-pcr-basics/taqman-vs-sybr-chemistry-real-time-pcr.html#compare...
SYBR Green染料法相对定量qPCR实验 实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 实验材料:动物组织或血液 试剂/试剂盒:RNA提取试剂盒、Quantscript RT Kit试剂盒、荧光定量PCR Mix (SYBRGreenRealtimePCRMasterMix)、TRIZON...
以下是sybr green染料法的引物设计原则: 一、引物长度 1. 引物长度一般在18-24个碱基对之间。过长的引物可能使PCR反应失败,而过短的引物可能导致非特异性扩增。 二、引物Tm值 2. 引物的Tm值应该尽量接近。Tm值的计算可以通过一些软件如OligoCalc或Primer3进行预测。Tm值的差异过大可能会导致引物的不对称性,从而...
Table 1 RT-qPCR一步法和两步法比较 AllStart®/ATG® HSOne Step RT-qPCR SYBR Green Kit (ATG #R305 & ATG #R405) 基于 SYBR Green I 嵌合荧光法,针对以RNA为模板 (如RNA类病毒) 的荧光定量PCR快速检测设计,结合使用基因特异性引物,可使逆转录和qPCR反应在一管内完成,无需额外操作,降低污染的风险...
摘要:为建立检测猫麻疹病毒(FeMV)敏感、特异且快速的方法,本研究根据FeMV的L基因保守区设计引物,通过反应条件的优化,建立了快速检测FeMV的SYBR Green I 荧光定量RT-PCR 方法。以质粒标准品pMD19t-FeMV-L为模板,结果显示该方法最低检测下线是30拷贝/ μL,是常规RT-PCR 方法的100倍。组内和组间的重复性试验显...
SYBR Green I染料法的工作原理【实验代做】 1、SYBR Green I染料试剂 一般将可与双链DNA发生结合的小分子分为以下两类: 1)嵌入剂 2)小沟结合物 无论哪种结合方法,用于PCR实时检测的DNA结合染料都需要满足以下两个条件: 1)结合至双链DNA时,会有增强的荧光 ...
SYBR Green染色方法
在设计引物时,使用SYBR Green I 染料需要遵循一定的原则,以确保PCR实验的准确性和可靠性。本文将为你介绍SYBR Green I 染料法设计引物的原则。 1. 引物长度 在设计引物时,需要考虑引物的长度。一般来说,引物的长度应该在18到25个碱基对之间。引物过短可能导致特异性不足,引物过长则可能导致PCR效率下降。合适的...