RIP和RNA pull-down等实验技术是我们深入研究RNA和蛋白质相互作用的关键工具。RIP运用目标蛋白的特异性抗体分离纯化与蛋白相互作用的RNA，RNA pull-down通过RNA探针捕获与之相互作用蛋白质。今天带大家了解一下RIP技术，具体情况如下：RIP技术（RNA Binding Protein lmmunoprecipitation，RNA结合蛋白免疫沉淀），是研究细胞...
图RNA pulldown质谱检测示例图A RNA pulldown蛋白银染示例图。B,C 质谱检测结果GO聚类分析示例图。D,E 质谱检测结果KEGG信号通路分析示例图。F 筛选出蛋白相互作用图
1.RNA pull-down 第一天——生物素探针标记RNA 1)前期准备:取出Pierce™ RNA 3' End Desthiobiotinylation Kit,将试剂盒中的PEG及DMSO置于常温,其余组分置于冰上融化,也可将PEG放于37摄氏度融化;打开PCR仪; 2)依照RNA母管含量,用DEPC水溶解RNA,我们通常是10ug/管,用10μl DEPC水溶解。同时溶解试剂盒中Con...
RNA pull-down assay using Streptavidin magnetic beads 1 RNA pull-down 第一天——生物素探针标记RNA 1.前期准备:取出Pierce™ RNA 3' End Desthiobiotinylation Kit,将试剂盒中的PEG及DMSO置于常温,其余组分置于冰上融化,也可将PEG放于37摄氏度融化;...
RNA-Protein Pull Down Kit 描述 一、实验原理 RNA pull-down是研究细胞内RNA与蛋白/RNA结合情况的技术。先将RNA进行标记(如生物素标记),再与细胞裂解液共同孵育,从而形成RNA-RNA/蛋白质复合物,进而检测与之结合的RNA或蛋白质。复合物洗脱后,通过荧光定量PCR(RNA pull down-QPCR)或高通量测序(RNA pull down-se...
1RNA pull-down 第一天——生物素探针标记RNA 1.前期准备:取出Pierce™ RNA 3' End Desthiobiotinylation Kit,将试剂盒中的PEG及DMSO置于常温,其余组分置于冰上融化,也可将PEG放于37摄氏度融化;打开PCR仪; 2.依照RNA母管含量,用DEPC水溶解RNA,我们通常是10ug/管,用10μl DEPC水溶解。同时溶解试剂盒中Contr...
4. RNA pull-down的操作流程 4.1 样本裂解 4.1.1 细胞样本 裂解液准备:取990μL的IP Lysis Buffer,加入10μL Protease Inhibitor(100X),混匀。 细胞收集与洗涤:收集2×10^7个细胞,用2mL PBS洗涤,离心后弃上清,收集细胞沉淀。预留1/4细胞样品用于后续RNA提取,使用无核酸酶的EP管存放并在-80℃保存。 细胞裂...
1.RNA pull-down 第一天——生物素探针标记RNA 1)前期准备:取出Pierce™ RNA 3' End Desthiobiotinylation Kit,将试剂盒中的PEG及DMSO置于常温,其余组分置于冰上融化,也可将PEG放于37摄氏度融化;打开PCR仪; 2)依照RNA母管含量,用DEPC水溶解RNA,我们通常是10ug/管,用10μl DEPC水溶解。同时溶解试剂盒中Con...
RNA-Protein Pull Down Kit 描述 一、实验原理 RNA pull-down是研究细胞内RNA与蛋白/RNA结合情况的技术。先将RNA进行标记(如生物素标记),再与细胞裂解液共同孵育,从而形成RNA-RNA/蛋白质复合物,进而检测与之结合的RNA或蛋白质。复合物洗脱后,通过荧光定量PCR(RNA pull down-QPCR)或高通量测序(RNA pull down-se...
d)吸去上清,用25μl预冷的0.1% SDS溶液重悬beads,加6.25μl 的5X蛋白上样缓冲液,100℃金属浴煮10min.之后立即置于冰上5min,再置于磁力架上吸取上清至新的EP管中,准备蛋白上样。 7)蛋白的检测 可采用western blot 或质谱继续下游蛋白的验证。 以上就是的RNA pull-down技术的超详细秘籍啦!