图2 RNA Pull-down实验流程图（Panda et al., 2016）。RNA Pull-down技术实验流程主要包括以下几个步骤：（1）构建含目的基因序列质粒：选择自己感兴趣的基因，根据其序列用同源重组方式或全基因合成构建含目的基因序列质粒；并测序验证序列准确性，并提取含目的基因序列质粒备用；（2）转录模板的获取：T7 RNA聚合...
水洗涤：弃30%乙醇，加入200 ml Milli-Q级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动10 min，摇动速度为60-70 rpm。如果本步骤用水洗涤更长时间，对降低染色的背景略有帮助。增敏：弃水，加入100 ml银染增敏液(1X)，在摇床上室温摇动2 min，摇动速度为60-70 rpm。水洗涤(共2次)：弃原有溶液，加入200 ml Milli-...
1:制备探针 2:蛋白+探针+磁珠孵育 3:洗脱 4:跑胶银染质谱/WB RNA pull down技术流程图 一:探针制备: 1实验方法 1.1 PCR扩增目的片段 在200ul PCR管中,以含目的基因的质粒作为模板进行PCR扩增。扩增反应体系如下表所示。PCR反应条件为94℃预变性2min,循环参数分别为94℃ 15s,55℃ 30s,68℃ 1min/kb,共35...
rna pull down RNA pull down实验是一种用于研究RNA与蛋白质相互作用的技术,其步骤通常包括以下几个阶段: 1.构建RNA过表达质粒:需要通过基因合成并经过测序验证来构建RNA过表达质粒。 2.体外转录模板准备:设计含有T7启动子的引物,通过PCR扩增得到转录模板。 3.体外转录:以PCR产物为模板,进行体外转录以获得目的RNA...
详细实验操作步骤:探针法RNA pull-down,这样做!, 视频播放量 3317、弹幕量 1、点赞数 70、投硬币枚数 11、收藏人数 206、转发人数 28, 视频作者 金开瑞生物, 作者简介 实验问题咨询及生物类合作咨询:13343461158; 蛋白抗体、检测分析/分子互作、基因/引物合成各生物领
rna pull down 原理与操作步骤rna pull down原理与操作步骤 RNA pull down是一种用于研究RNA与蛋白质相互作用的实验技术。该技术允许研究者鉴定和鉴定与特定RNA序列或结构相关的结合蛋白质。 操作步骤: 1. RNA探针设计:选择需要研究的RNA序列或结构,并设计相应的RNA探针。RNA探针通常是通过体外转录的方式合成。 2....
RNA pull down实验分为两个步骤:RNA的共价固定和RNA与RNA结合蛋白的识别。 1. RNA的共价固定:在这一步骤中,使用一种活性交联剂,例如二氧化硅(DMS)或者N-乙酰氨基酮(ANH)将RNA与RNA结合蛋白进行共价结合,形成RNA-蛋白复合物。 2. RNA与RNA结合蛋白的识别:共价结合的RNA-蛋白复合物经过裂解并加入亲和纯化材料,例...
以下是RNA Pull Down实验的基本流程: 1. 样品准备:首先,我们需要一个含有目标RNA的细胞或组织样本。这个样本可以通过常规的细胞培养或组织裂解方法获取。同时,为了防止RNA降解,所有操作过程需要在RNA酶抑制剂的存在下进行。 2. 生物素标记:目标RNA通常会被生物素标记。这可以通过化学修饰或利用生物素依赖的转录系统来...
DNA pull-down实验怎么做?手把手教你学会蛋白质与DNA互作实验! 6690 5 8:46 App 研究非编码RNA必备神器之一:starbase使用讲解 3786 1 4:48 App 详细实验操作步骤:探针法RNA pull-down,这样做! 1809 1 13:52 App 基因合成之连接转化(上) 6231 3 4:06 App 015. 男性太常做愛小心腎虧? 4969 20 50:...
这种技术的原理和步骤我们将逐步解释如下。 一、RNA pull-down的原理 RNA pull-down技术的原理基于RNA的序列与蛋白质的互补性。在实验中,我们通常使用目标RNA序列(也称为“诱饵RNA”)的互补RNA链或合成肽核苷酸。通过这种互补性,诱饵RNA能够特异性地结合目标蛋白质。 二、RNApull-down的步骤 1.设计和合成诱饵RNA ...