图2 RNA Pull-down实验流程图（Panda et al., 2016）。RNA Pull-down技术实验流程主要包括以下几个步骤：（1）构建含目的基因序列质粒：选择自己感兴趣的基因，根据其序列用同源重组方式或全基因合成构建含目的基因序列质粒；并测序验证序列准确性，并提取含目的基因序列质粒备用；（2）转录模板的获取：T7 RNA聚合...
接下来就是反转录了。这一步也很关键,毕竟我们要把RNA变成cDNA才能进行后续的实验。具体操作如下: 配制RT反应液:在冰上进行这个步骤。为了减少误差,建议稍微多配一点反应液,最后再加入RNA样品。 反转录程序:按照37℃,15min;85℃,5sec的程序进行反转录。完成后,把cDNA放在-20℃保存备用。 定量PCR检测 📊 最后...
终止：弃银染显色液，加入100 ml银染终止液(1X)，在摇床上室温摇动10 min，摇动速度为60-70 rpm。水洗涤：弃银染终止液，加入100 ml Milli-Q级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动2-5 min，摇动速度为60-70 rpm。保存：可在Milli-Q级纯水或双蒸水中保存。或采用适当的方式制备成干胶。十、实验结果 10.1 W...
RNA pull down 实验步骤1、构建 RNA 过表达质粒：基因合成 +测序验证；2、体外转录模板准备：设计含 T7 启动子引物，PCR 扩增得到转录模板；3、体外转录：以 PCR 产物为模板，体外转录得到目的 RNA；4、RNA pull down ：通过磁珠 -RNA 探针复合物富集互作的蛋白；5、银染质检：SDS -PAGE 电泳银染检测富集蛋白...
RNA Pull down技术利用带标签的RNA探针与目标蛋白质进行体外或体内结合，然后通过亲和分离或免疫共沉淀等方法将结合的复合物分离出来，最后对分离出来的复合物进行检测和分析。这种技术可以快速、有效地筛选和鉴定与特定RNA结合的蛋白质，同时也可以检测和分析RNA的结构和功能。二、实验步骤 设计并合成带标签的RNA探针：...
rna pull down 质谱步骤rna pull down RNA pull down实验是一种用于研究RNA与蛋白质相互作用的技术,其步骤通常包括以下几个阶段: 1.构建RNA过表达质粒:需要通过基因合成并经过测序验证来构建RNA过表达质粒。 2.体外转录模板准备:设计含有T7启动子的引物,通过PCR扩增得到转录模板。 3.体外转录:以PCR产物为模板,...
RNA Pull down技术原理 RNA pull down实验的大致流程：1、探针制备 设计并合成含有T7启动子的特异性引物。使用含有目的基因的质粒作为模板进行PCR扩增。利用PCR产物作为模板进行体外转录，获得目的RNA。对目的RNA进行标记，通常使用生物素标记。2、细胞裂解液准备 收集细胞并裂解，制备细胞裂解液。通过离心去除细胞碎片，...
以下是RNA Pull Down实验的详细步骤: 准备RNA探针:首先,你需要合成带有特定标签(如生物素)的RNA探针。这可以通过体外转录或化学合成的方法实现。 细胞处理:将细胞处理成你需要的状态,例如转染、诱导表达等。这取决于你的实验目的和细胞类型。 RNA探针与细胞裂解液混合:将合成好的RNA探针与细胞裂解液混合,使RNA探针...