图4 我司RNA Pull-down案例展示：（A）体外转录法电泳检测图（阳性），左图：PCR扩增DNA的电泳；右图：体外转录标记RNA的电泳；（B）RNA Pull-down的银染结果；（C）MS差异蛋白鉴定及KEGG分析。伯远医学拥有一流的技术团队、丰富的项目经验，提供专业RNA Pull-down技术服务，适用于RNA与蛋白结合的领域研究，欢迎大...
Pull down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系,从体外转录或翻译体系中检测出蛋白相互作用关系。RNA pull-down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。RNA pull down是使用体外转录法标记生物素RNA探针,然...
复合物洗脱后，通过荧光定量PCR(RNA pull down-QPCR)或高通量测序(RNA pull down-seq)方法来鉴定目标RNN是否与某些RNA分子相互作用，通过Western blot(pull down-WB)实验和质谱(pull down-MS)技术检测目标RNA是否与某些蛋白相互作用。RNA Pull down技术原理 RNA pull down实验的大致流程：1、探针制备 设计并合...
结果说明:通过RPd-WB验证目的RNA和候选蛋白互作。 本次实验的目的是使用RNA-Pull down-MS或者RNA-Pull down-WB的方法,通过体外转录法标记生物素RNA探针,在目的细胞中通过目的探针把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,经过分离纯化并对结合在复合物上的蛋白进行MS或WB分析,寻找目的RNA的靶标蛋白,或在不同遗传背景或处理...
RNA-Pull down实验详细操作方法步骤: 一、细胞收集(对于单层细胞或贴壁细胞) 准备细胞5E7细胞。 用10 mL冰冷的PBS洗涤培养瓶或平板上的细胞两次。 加入10 mL冰冷的PBS。从每个培养瓶或平板上刮下细胞,然后转移到离心管。 通过在4°C下以1500 rpm离心5 min来收集细胞,并丢弃上清液。细胞沉淀-80℃保存。
1)选择合适的亲和分离介质:根据实验需求选择合适的磁珠或色谱柱等亲和分离介质。例如,可以使用 streptavidin beads 进行生物素标记的RNA pull down实验,或使用Ni Sepharose或者GST beads进行含有His/GST标签的蛋白质的亲和分离。(相关好物可在最下方查看) 2)控制洗脱条件:洗脱条件可以影响复合物的分离效率和纯度。需要根...
RNA-Pull down实验详细操作方法步骤: 一、细胞收集(对于单层细胞或贴壁细胞) 准备细胞5E7细胞。用10 mL冰冷的PBS洗涤培养瓶或平板上的细胞两次。加入10 mL冰冷的PBS。从每个培养瓶或平板上刮下细胞,然后转移到离心管。通过在4°C下以1500 rpm离心5 min来收集细胞,并丢弃上清液。细胞沉淀-80℃保存。
RNA-Pull down实验详细操作方法步骤: 一、细胞收集(对于单层细胞或贴壁细胞)准备细胞5E7细胞。用10 mL冰冷的PBS洗涤培养瓶或平板上的细胞两次。加入10 mL冰冷的PBS。从每个培养瓶或平板上刮下细胞,然后转移到离…
5. 通过洗涤去除未结合的蛋白质,还原RNA-DNA复合物,从而使靶RNA单链从DNA探头上解离,这部分是拉下(pull-down)步骤。 6. 将洗涤过程中留下的蛋白质分离、纯化,并通过蛋白质分析技术进行分析。 总之,RNA pull-down实验是一种简单有效的技术,可用于确定RNA结合伴侣,发现潜在的RNA功能以及了解它们与蛋白质相互作用...
RNA-RNA pull-down是检测RNA与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。RNA-RNA pull-down使用体外转录法标记生物素RNA探针，然后与胞浆提取液孵育，形成RNA-RNA复合物。该复合物可与链亲和素标记的磁珠结合，从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后，通过qRT-PCR实RNA-RNA pull-down是检测RNA与其靶RNA之间...