终止：弃银染显色液，加入100 ml银染终止液(1X)，在摇床上室温摇动10 min，摇动速度为60-70 rpm。水洗涤：弃银染终止液，加入100 ml Milli-Q级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动2-5 min，摇动速度为60-70 rpm。保存：可在Milli-Q级纯水或双蒸水中保存。或采用适当的方式制备成干胶。十、实验结果 10.1 W...
RNA Pull-down技术实验流程主要包括以下几个步骤：（1）构建含目的基因序列质粒：选择自己感兴趣的基因，根据其序列用同源重组方式或全基因合成构建含目的基因序列质粒；并测序验证序列准确性，并提取含目的基因序列质粒备用；（2）转录模板的获取：T7 RNA聚合酶特异性识别来自T7噬菌体的启动子序列。为了使T7 RNA聚合...
接下来就是反转录了。这一步也很关键,毕竟我们要把RNA变成cDNA才能进行后续的实验。具体操作如下: 配制RT反应液:在冰上进行这个步骤。为了减少误差,建议稍微多配一点反应液,最后再加入RNA样品。 反转录程序:按照37℃,15min;85℃,5sec的程序进行反转录。完成后,把cDNA放在-20℃保存备用。 定量PCR检测 📊 最后...
5、水洗涤:弃原有溶液,加入20ml双蒸水,在摇床上室温摇动1分钟,摇动速度为60-70rpm。 6、重复步骤5 7、银染:弃水,加入20ml银溶液(1X),在摇床上室温摇动10分钟,摇动速度为60-70rpm。 8、水洗涤:弃原有溶液,加入20ml双蒸水,在摇床上室温摇动1-1.5分钟,摇动速度为60-70rpm。 9、显色:弃水,加入20ml银染...
RNA pull down实验的大致流程：1、探针制备 设计并合成含有T7启动子的特异性引物。使用含有目的基因的质粒作为模板进行PCR扩增。利用PCR产物作为模板进行体外转录，获得目的RNA。对目的RNA进行标记，通常使用生物素标记。2、细胞裂解液准备 收集细胞并裂解，制备细胞裂解液。通过离心去除细胞碎片，收集上清液。3、RNA-蛋白...
RNA Pull down（RNA下拉）是一种生物实验技术，被广泛应用于研究RNA与蛋白质之间的相互作用以及寻找可能的未知RNA结合蛋白。以下是对RNA Pull down技术的详细介绍：一、基本原理 RNA Pull down技术利用带标签的RNA探针与目标蛋白质进行体外或体内结合，然后通过亲和分离或免疫共沉淀等方法将结合的复合物分离出来，最后对...
rna pull down 质谱步骤rna pull down RNA pull down实验是一种用于研究RNA与蛋白质相互作用的技术,其步骤通常包括以下几个阶段: 1.构建RNA过表达质粒:需要通过基因合成并经过测序验证来构建RNA过表达质粒。 2.体外转录模板准备:设计含有T7启动子的引物,通过PCR扩增得到转录模板。 3.体外转录:以PCR产物为模板,...
以下是RNA Pull Down实验的详细步骤: 准备RNA探针:首先,你需要合成带有特定标签(如生物素)的RNA探针。这可以通过体外转录或化学合成的方法实现。 细胞处理:将细胞处理成你需要的状态,例如转染、诱导表达等。这取决于你的实验目的和细胞类型。 RNA探针与细胞裂解液混合:将合成好的RNA探针与细胞裂解液混合,使RNA探针...
以下是RNA Pull Down实验的基本流程: 1. 样品准备:首先,我们需要一个含有目标RNA的细胞或组织样本。这个样本可以通过常规的细胞培养或组织裂解方法获取。同时,为了防止RNA降解,所有操作过程需要在RNA酶抑制剂的存在下进行。 2. 生物素标记:目标RNA通常会被生物素标记。这可以通过化学修饰或利用生物素依赖的转录系统来...