图2 RNA Pull-down实验流程图（Panda et al., 2016）。RNA Pull-down技术实验流程主要包括以下几个步骤：（1）构建含目的基因序列质粒：选择自己感兴趣的基因，根据其序列用同源重组方式或全基因合成构建含目的基因序列质粒；并测序验证序列准确性，并提取含目的基因序列质粒备用；（2）转录模板的获取：T7 RNA聚合...
在摇床上室温摇动10 min，摇动速度为60-70 rpm。水洗涤：弃银染终止液，加入100 ml Milli-Q级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动2-5 min，摇动速度为60-70 rpm。保存：可在Milli-Q级纯水或双蒸水中保存。或采用适当的方式制备成干胶。十、实验结果 10.1 WB预实验验证抗体质量（WB项目-质控1）例如：结果说明...
RNA pull down 实验步骤1、构建 RNA 过表达质粒：基因合成 +测序验证；2、体外转录模板准备：设计含 T7 启动子引物，PCR 扩增得到转录模板；3、体外转录：以 PCR 产物为模板，体外转录得到目的 RNA；4、RNA pull down ：通过磁珠 -RNA 探针复合物富集互作的蛋白；5、银染质检：SDS -PAGE 电泳银染检测富集蛋白...
RNA pull down:RNA沉淀检测,是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验方法之一。使用体外转录将RNA进行生物素标记,并与细胞蛋白裂解液孵育,形成RNA-蛋白复合物。复合物通过磁珠结合后分离,复合物纯化洗脱后通过Western blot验证检测特性的蛋白。若筛选可能结合的蛋白通过质谱实验进行检测筛选。 实验流程: 2.1生物...
RNA pull down实验是一种用于研究RNA与蛋白质相互作用的技术,其步骤通常包括以下几个阶段: 1.构建RNA过表达质粒:需要通过基因合成并经过测序验证来构建RNA过表达质粒。 2.体外转录模板准备:设计含有T7启动子的引物,通过PCR扩增得到转录模板。 3.体外转录:以PCR产物为模板,进行体外转录以获得目的RNA。 4.蛋白样品准...
以下是RNA Pull Down实验的基本流程: 1. 样品准备:首先,我们需要一个含有目标RNA的细胞或组织样本。这个样本可以通过常规的细胞培养或组织裂解方法获取。同时,为了防止RNA降解,所有操作过程需要在RNA酶抑制剂的存在下进行。 2. 生物素标记:目标RNA通常会被生物素标记。这可以通过化学修饰或利用生物素依赖的转录系统来...
详细实验操作步骤:探针法RNA pull-down,这样做!, 视频播放量 3317、弹幕量 1、点赞数 70、投硬币枚数 11、收藏人数 206、转发人数 28, 视频作者 金开瑞生物, 作者简介 实验问题咨询及生物类合作咨询:13343461158; 蛋白抗体、检测分析/分子互作、基因/引物合成各生物领
RNA pull-down其目的是检测与RNA互作的蛋白。实验过程简单来说就是把感兴趣的RNA进行体外转录,并标记(如生物素标记),再与细胞裂解液共同孵育,形成RNA-蛋白质复合物,然后将分离得到蛋白质,通过WB 或质谱进行验证或鉴定。 1、磁珠准备 (1)取3 µg Biotin标记的RNA,加入适量Structure Buffer,使得RNA形成二级结构。
上次Andy介绍到RNA pull-down的原理和做该实验的准备工作,在万事俱备以后,就可以开始为期三天的正式实验了。我们这次的实验流程是采用的生物素标记的磁珠法,也是比较常规的一种方法~ RNA pull-down assay using Streptavidin magnetic beads 1 RNA pull-down...
上次Andy介绍到RNA pull-down的原理和做该实验的准备工作,在万事俱备以后,就可以开始为期三天的正式实验了。我们这次的实验流程是采用的生物素标记的磁珠法,也是比较常规的一种方法~ RNA pull-down assay using Streptavidin magnetic beads 1 RNA pull-down 第一天——生物素探针标记RNA ...