RNA pull down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验方法之一。使⽤体外转录法标记⽣物素RNA探针，然后与胞浆蛋⽩提取液孵育，形成RNA-蛋⽩质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合，从⽽与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后，通过WB 实验检测特定的RNA 结合蛋⽩是否与RNA 相互作...
3.体外转录:以PCR产物为模板,体外转录得到目的RNA 4.RNA pull down:通过磁珠-RNA探针复合物富集互作的蛋白 5.银染质检:SDS-PAGE电泳银染检测富集蛋白的情况 6.质谱鉴定:通过质谱鉴定实验组与对照组的差异蛋白;进而筛选可能的互作蛋白。 相关实例图:A:以构建过表达质粒为模板+设计合成好的引物,扩增得到体外转录模板...
RNA Pulldown实验,是一项用于筛选与靶RNA结合的蛋白质的定性实验。通过体外转录法或合成生物素标记RNA探针,与细胞裂解液孵育,形成生物素-RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素磁珠结合,从而将靶RNA结合的蛋白从细胞裂解液中分离出来。洗脱后的复合物,可以通过Western Blot实验,检测靶RNA是否与已知的蛋白结合,还...
3.体外转录:以PCR产物为模板,体外转录得到目的RNA 4.RNA pull down:通过磁珠-RNA探针复合物富集互作的蛋白 5.银染质检:SDS-PAGE电泳银染检测富集蛋白的情况 6.质谱鉴定:通过质谱鉴定实验组与对照组的差异蛋白;进而筛选可能的互作蛋白。 相关实例图:A:以构建过表达质粒为模板+设计合成好的引物,扩增得到体外转录模板...
RNA-pulldown 实验可以在体外样品中通过高亲和性的标签(例如生物素,biotin),选择性地获取蛋白-RNA复合物。RNA探针可以是生物素化标记的,和细胞裂解液或者重组蛋白孵育后,通过strepavidin agarose 或者磁珠进行分离。分离后获得的蛋白可以通过western blot 或者质谱(mass spectrometry)来进行分析。这是一种研究lncRNA和蛋白...
RNA pull down是一种流行的以 RNA 为中心研究RNA-蛋白质相互作用的方法。用于分离RNA 结合蛋白复合物的方法可分为两大类:体外和体内纯化策略。迄今为止,大多数已知的RNA-蛋白质相互作用已使用体外RNA 下拉分析确定。RNP复合物的体外重组采用了各种 RNA 标记策略,例如共价连接、生物素标记或适体,确保目标RNA 固定在...
这是研究的难点。想知道LINC01138是通过结合了什么蛋白,发挥了癌基因的作用,就需要用到今天的重点讲解的技术——RNA pull down技术! 这个技术听上去很魔幻,其实就是富集某个具体的长非编码RNA,然后分析它所结合的蛋白质。 主要实验分为2步:(以下是简...
DNA pull-down实验首先针对靶标区域设计特异性DNA探针,探针经过脱硫生物素标记,跟偶联在磁珠上的链霉亲和素结合;细胞核提取物与磁珠-DNA探针孵育,作用蛋白质分子可以和DNA探针特异性结合;纯化出与靶DNA片段结合的蛋白复合体,经过洗涤可...
RNA pull-down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。RNA pull-down使用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后,通过Western Blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与RNA相互作...
RNA pull down技术实验—辉骏服务内容 RNA pull down实验外包样本要求 ▲注意:以上均为每组样本的送样量,如果实验和对照组用的样本一致,此样本量*2。详细送样指南可联系辉骏生物索取。 保存及运输:-80℃保存,干冰取样/运输,至少在送样前2天通知我司。