RNA pull down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验方法之一。使⽤体外转录法标记⽣物素RNA探针，然后与胞浆蛋⽩提取液孵育，形成RNA-蛋⽩质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合，从⽽与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后，通过WB 实验检测特定的RNA 结合蛋⽩是否与RNA 相互作...
3.体外转录:以PCR产物为模板,体外转录得到目的RNA 4.RNA pull down:通过磁珠-RNA探针复合物富集互作的蛋白 5.银染质检:SDS-PAGE电泳银染检测富集蛋白的情况 6.质谱鉴定:通过质谱鉴定实验组与对照组的差异蛋白;进而筛选可能的互作蛋白。 相关实例图:A:以构建过表达质粒为模板+设计合成好的引物,扩增得到体外转录模板...
RNA Pulldown实验,是一项用于筛选与靶RNA结合的蛋白质的定性实验。通过体外转录法或合成生物素标记RNA探针,与细胞裂解液孵育,形成生物素-RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素磁珠结合,从而将靶RNA结合的蛋白从细胞裂解液中分离出来。洗脱后的复合物,可以通过Western Blot实验,检测靶RNA是否与已知的蛋白结合,还...
DNA pull-down实验首先针对靶标区域设计特异性DNA探针,探针经过脱硫生物素标记,跟偶联在磁珠上的链霉亲和素结合;细胞核提取物与磁珠-DNA探针孵育,作用蛋白质分子可以和DNA探针特异性结合;纯化出与靶DNA片段结合的蛋白复合体,经过洗涤可...
RIP、RNA pull-down和MeRIP等实验技术是我们深入研究RNA和蛋白质相互作用的关键工具。RIP用于选择性地富集与特定RNA相互作用的蛋白质,RNA pull-down通过RNA探针捕获相互作用蛋白质,而MeRIP则用于甲基化RNA的研究。下面就让我们详细了解一下—— RIP RIP,全称为RNA Binding Protein ImmunoprecipitationAssay,RNA 结合蛋白...
1、 实验简介 RNA pull down是用于检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间互作的实验手段。RNA pull down使用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后,通过Western Blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与RN...
RNA pull down是一种流行的以 RNA 为中心研究RNA-蛋白质相互作用的方法。用于分离RNA 结合蛋白复合物的方法可分为两大类:体外和体内纯化策略。迄今为止,大多数已知的RNA-蛋白质相互作用已使用体外RNA 下拉分析确定。RNP 复合物的体外重组采用了各种 RNA 标记策略,例如共价连接、生物素标记或适体,确保目标RNA 固定...
RNA pull down是一种分子生物学技术,可以用来研究RNA与蛋白质之间的相互作用。它的原理是通过向细胞中添加含有RNA结合位点的蛋白质来捕获与RNA相互作用的蛋白质。 广州如期生物技术有限公司是一家专门从事生物技术研究的公司,它提供RNA pull down实验的服务。 它的主要流程如下: 样本准备:选择合适的生物样本,并对其...
RNA pull down实验是一种常用的研究RNA与蛋白互作关系的方法。以下是其基本步骤：RNA探针制备：首先，需要合成包含RNA序列的探针。这可以通过化学合成或体外转录来完成。探针可以是全长RNA序列，也可以是包含特定结构、序列或修饰的片段。探针标记：将RNA探针标记上适当的报告分子，如荧光染料或放射性同位素。
RNA pull down技术是一个非常经典的以RNA为研究对象,寻求互作蛋白的技术。其技术原理是,体外转录或化学合成获取目标RNA,对RNA末端进行生物素标记制备探针,而后将标记生物素的RNA与蛋白裂解液进行孵育,获取探针-蛋白复合物,而后利用链霉亲和素磁珠结合探针-蛋白复合物,洗脱非特异性蛋白后,western-blot检测特定蛋白或者质...