WB实验标准protocol,成功完成Western Blot检测 成功完成Western Blot检测,必须满足4个条件: 1.凝胶洗脱:转移期间蛋白质必须从凝胶中洗脱出来,如果蛋白质还截留在凝胶中,将无法在膜上进行分析2.吸附到膜上:在转移过程中蛋白质必须吸附到膜上,如果蛋白不吸附,将无法在膜上进行分析3.处理期间仍截留在膜上:在转移后的...
https://www.youtube.com/watch?v=tL22O5yV9rA新手向,Western Blot Step-by-Step Protocol 详解,实验技术指南,熟肉, 视频播放量 1148、弹幕量 1、点赞数 47、投硬币枚数 8、收藏人数 155、转发人数 7, 视频作者 核能垃圾桶, 作者简介 工作太忙,更新随缘～,相关视频:【
Western blot素来就是个老生常谈的实验,饶是如此,新手们仍是深觉此坑易入不易出,但老司机却已经达到坐看云起时的淡然境界,原因无他,多番的千锤百炼早已练就了金刚不坏之身,深谙WB实验的他们对其流程中的任一细节都了如指掌。 现如今就将这素不外传的操作秘籍分享给大家,让大家可愉快与WB实验玩耍。
Incubate the blot for 1 hour at room temperature, or overnight at 4°C with agitation. Antibody Incubation: Dilute the primary antibody to the recommended concentration/dilution in 5% nonfat dry milk/TBS-T. Place the membrane in the primary antibody solution and incubate for 2 hours at room ...
WesternBlot原理、protocol洗膜时间可以稍微长一点一抗和二抗的比例需要参考说明书保存和回收条件也是一抗是什么动物来源的二抗就是抗一抗动物的抗体比如说一抗是来源于rabbit二抗就是antirabbit WesternBlot原理、protocol 一、组织、细胞总蛋白抽提:参考相关裂解液; 二、蛋白浓度测定:BCA法,这个结果要参考说明书!
WesternBlot最全攻略:从protocol到问题解决 蛋白免疫印迹(western blotting)一般由凝胶电泳、样品的印迹和免疫学检测3个部分组成,是根据抗原抗体特异性结合检测样本中某种蛋白的方法,与ELISA不同的地方在于WB是一种半定量的检测方法。 操作流程如下: 下面详细介绍一下每个操作步骤: 一、样本的制备 (1)样本一般是组织和...
三、Western blot步骤: (一)、玻板的清洗: 自来水→75%酒精擦拭→ddH2O→竖放晾干/吹干(做胶的一面朝内)【勿用手指触摸玻板内侧面】装板: 低的一面向内,确认玻板底部平齐,插入斜楔板压实卡紧,加ddH2O不漏,滤纸吸干水; (二)、配胶(1.0mm): 分离胶 5% 浓缩胶, 3 ml/块胶 ...
Stripping and Reprobing a Western blot: 1. Remove membrane from plastic following initial detection with LumiGLO. 2. Rinse membrane for 30 - 90 minutes at 70°C in 2% SDS(w/v)/62.5 mM Tris-HCl (pH 6.8 at 20°C)/100 mMβ-mercaptoethanol. 3. Wash membrane 2 times in 10 mM Tris-...
Western_Blot_protocol Western Blot Protocol (一)取材 当天提蛋白，来自cell culture中的传代cell line。1.取种有细胞的六孔板，真空吸去培养液，PBS洗3遍。2.加入裂解液，裂解液配方：1份PI（蛋白质抑制剂，10×原液加PBS稀释至 1×），1份TritonX-100（10×原液加PBS稀释至1×），8份PBS。3.用刮刀把...
1、移除旧培养液 2、每孔加PBS1ml，漂洗1到2次 3、每孔加蛋白裂解液100ul（蛋白裂解液不易加多，多了会稀释蛋白浓度）4、然后用细胞刮棒来回刮除细胞，用枪头吸出液体至干净的EP管（操作最好在冰上，尽量吸干净）5、短暂振荡一下，置冰静置15到30分钟 6、离心：12000转，20min。离心结束后...