Western blot检测目的蛋白的表达情况。 另一份用于免疫沉淀,具体操作如下: 1)每管样品加入1uL标签抗体或特异性蛋白抗体,将EP管固定到混匀器上, 4℃下匀速旋转lh,使目的蛋白与抗体充分结合。 2)每管样品加入40uL protein G agarose,再次将EP管固定到混匀器上,4℃下 匀速旋转过夜,使抗体充分结合到protein G ag...
2）实验与Protocol-分子机制 3）实验与Protocol-细胞交互 4）实验与Protocol-直接作用机制 5）中文版69...
(2) 取少量裂解液(25-30ul)以备 Western blot。 (3)平衡 beads:取 0.5mlEP 管,加入 10ul Beads,将提前放置在冰上 的 Lysis buffer 500ul 加入 EP 管中,混合后再将小管放入 1.5 的 EP 管 中离心,200rcf,1min(枪头剪一点吸 Beads,Beads 用量不宜过多) (4)弃去上面的 Lysis buffer,用小针头平面...
IP & WB protocol (以6孔板转染和FLAG-IP后WB为例,peteadam整理) 一质粒转染及蛋白制备 1 接种293细胞入6孔板,细胞密度不宜过大,待293细胞长到大约60%时,转染质粒(具体步骤可参见lipofectmin 2000试剂说明书),加3ml没有抗生素的培养基,48h后收集细胞。 2 吸净培养基,用PBS吹洗下细胞,入1.5ml的EP管。3000...
protocol optimization. Because cell lysates also contain proteases and phosphatases that can modify or degrade the target protein, most IP protocols are performed at 4°C. Proteasomal inhibitors, such as PMSF, aprotinin and leupeptin are...
Perform a western blot (WB) to detect IP results. Load the protein sample into the SDS-PAGE gel and refer to theWB protocolLight and heavy chain interference is common. If the target protein weight is close to 55kD, using a light chain secondary antibody is recommended. If the target pro...
1) 变性洗脱法:如果下游分析是用免疫印迹 (Western Blot),则通常直接使用 SDS-PAGE Loading Buffer 进行洗脱 (95°C 加热 5 mins)。该缓冲液可使蛋白质变性还原并用于电泳,十分高效,适用于亲和作用的解离。但该方法也会洗脱下抗体等非靶分子,且获得的蛋白不具备生物活性。
Western Blot 或质谱检测分析沉淀的诱饵蛋白及与其结合的靶标蛋白。 小贴士: 内源性 Co-IP 实验可选择蛋白 A/G 磁珠或蛋白 A/G 琼脂糖;外源性 Co-IP 实验中蛋白携带标签 (如 Flag、HA、c-Myc、GST 等),可以选择标签抗体类磁珠/琼脂糖凝胶珠 (如 Anti-Flag 磁珠、Anti-HA 磁珠、Anti-c-Myc 磁珠、Anti...
农杆菌侵染技术提供了将外源基因高效导入植物细胞的手段，而Co-IP则作为验证蛋白-蛋白相互作用的有力工具，通过将特定蛋白标记并表达于植物细胞内，实现其与潜在相互作用蛋白的共沉淀，进而通过Western blot等方法检测相互作用。实验操作中，需注意选择合适的烟草叶片进行侵染，确保叶片健康、无损伤。农杆菌侵染...
在Western blot 实验中,配胶时,建议先加水,再加Tris-HCL缓冲液,并且每加一种液体就混匀胶液。加入的TEMED有毒,务必在通风橱中操作,并且加入后立即混匀、灌胶。 …… 实验中需要注意的细节很多,一着不慎满盘皆输。为了帮助大家...