1.5 mRNA-LNP制剂的质量要求 根据2018年4月FDA “Liposome Drug Products”(脂质体药物产品)行业指南,mRNA原液药的放行及表征测试需要包括以下几个关键点:多分散性指数PDI、Zeta电位、mRNA鉴别和浓度、mRNA包封效率(%)、脂质特性和纯度、pH值和渗透压、残留溶剂和无菌性、稳定性、均匀性等。 mRNA-LNP成品(drug prod...
1.5 mRNA-LNP制剂的质量要求 根据2018年4月FDA “Liposome Drug Products”(脂质体药物产品)行业指南,mRNA原液药的放行及表征测试需要包括以下几个关键点:多分散性指数PDI、Zeta电位、mRNA鉴别和浓度、mRNA包封效率(%)、脂质特性和纯度、pH值和渗透压、...
通过活体成像,探索了不同缓冲体系mRNA-LNP在体内的表达情况。将HEPES、Tris和PBS LNPs静脉注射到年龄匹配的雌性BALB/c小鼠中,比较荧光素酶的表达水平和器官特异性。在注射后4和24 h时间点测量新鲜和解冻的LNPs的生物发光信号。在所有案例中,生物发光图像显示强烈的肝脏转染模式,与通常的LNP静脉注射制剂一致。总体而...
mRNA-LNPs水分含量可以高达30%,这表明LNP制剂中缓冲体系的选择可能会对LNP的形成、性质和稳定性产生巨大影响,尤其是考虑到mRNA-LNPs溶液需要在零度以下的温度下长期储存的情况。 缓冲液在冷冻时的结晶会严重影响生物制剂的性质,并会导致LNP破裂和聚集,这在最近的报道中得到了证实。此外,缓冲液在冻结时的一个特殊性质...
mRNA-LNP制剂工艺的质控也至关重要。将制备好的mRNA经由微流控等设备进行脂质纳米颗粒LNP包裹,过程中通过优化总流量(TFR)和流量比(FRR)来获得理想的粒径尺寸,由于微流控的两相溶液分别为溶解于酸性水相的核酸以及溶解于有机相的脂类,在这样复杂的混合溶液下,需要在包裹后进行缓冲液置换来稳定纳米脂质颗粒LNP结构,确...
冻干技术在低温真空下通过升华去除水分,可相对温和地将脆弱的生物大分子或胶体纳米颗粒制备成冻干制剂,已有研究显示该技术可满足mRNA-LNP在室温下的长期储存需求,并能维持复溶后的转染效力(瑞科吉生物早前就已发布全球首款冻干型mRNA疫苗的人体实验数据,证实了冻干mRNA疫苗复溶后可维持转染效力)。
Bruno表示,在mRNA-LNP临床转化的背景下,存储条件 (如水溶液、冷冻或冻干) 也必须仔细考虑,因为它们会影响mRNA-LNP制剂的长期稳定性。“糖稳定剂 (特别是蔗糖,海藻糖或甘露醇作为替代选择) 通常用于这种应用,”他说。 选择正确的非脂类赋形剂很重要 Jung评论说,除了保证mRNA-LNP的长期稳定性和体内性能外,mRNA-LNP的...
该研究测试了三种常见生物缓冲液——HEPES、Tris和PBS——在单次冻融前后与DLin-MC3-DMA mRNA-LNP制剂的相容性。通过电子显微镜、差示扫描量热法和膜流动性分析发现,不同缓冲液使LNP形态发生了不同的结构变化。采用体外和体内模型测量mRNA转染效率,发现Tris或HEPES缓冲液中的LNPs具有更好的冷冻保护效果以及与PBS相比...
LNP-mRNA制剂在临床前开发中的主要安全性问题可分为免疫致病性和肝脾毒性(仅考虑对修饰和/或dsRNA纯化后的mRNA的研究),了解LNP-mRNA制剂不同配方的不良反应机制有助于我们更好地设计、优化耐受性良好且有效的候选药物。 肝脾毒性 由于LNP-mRNA具有明显的肝脏和脾脏生物分布,肝脏和脾脏的显微镜观察和组织病理学是临床前...
用于NK细胞的mRNA-LNP制剂筛选和优化 自然杀伤(NK)细胞通过基因编码的表面受体消除癌症和病毒感染的细胞,参与免疫系统。因其先天的独立性以及显著降低毒性,已经成为过继细胞治疗(ACT)中T细胞的替代品。用mRNA工程化NK细胞增强其肿瘤靶向性和细胞毒性,在ACT中显示出巨大的潜力。然而,NK细胞的mRNA转染具有挑战,最常见的...