LNP 生产过程中关键质量指标有粒径、PDI(polydispersity index)、包封率、Zeta 电位、制剂 mRNA 完整性和递送系统各组分含量等。 01 LNP的粒径和PDI LNP 的平均粒径和粒径分布 PDI 是 LNP 质量和各种应用适宜性的重要因素,通常通过动态光散射(DLS)进行表征。研究...
mRNA制剂的主要工艺环节包括mRNA的包封/装载、复合物纯化、除菌过滤、无菌灌装等,如下图。整个制剂工艺的核心挑战在于递送系统的选择以及mRNA的包封/装载,其余步骤采用的是现有成熟工艺。以当前最主流的脂质纳米颗粒(LNP)载体为例,仅ZL相关问题,就足够头疼。 ▲ mRNA制剂生产工艺流程 1 mRNA原液复融 如果mRNA原液经冷...
mRNA-LNP制剂工艺流程 mRNA-LNP制剂工艺的质控也至关重要。将制备好的mRNA经由微流控等设备进行脂质纳米颗粒LNP包裹,过程中通过优化总流量(TFR)和流量比(FRR)来获得理想的粒径尺寸,由于微流控的两相溶液分别为溶解于酸性水相的核酸以及溶解于有机相的脂类,在这样复杂的混合溶液下,需要在包裹后进行缓冲液置换来稳定...
mRNA-LNP包封制备是mRNA制剂制备的关键工艺，除了脂质成分配方外，就是工艺过程的控制了，即如何控制mRNA与脂质成分的接触和相互作用过程，通过微流控技术以形成稳定、均一、收率高的mRNA-LNP复合物。mRNA-LNP溶液通过100kD/300kD TFF技术进行浓缩换液，mRNA-LNP复合物被截留，乙醇、制剂被洗滤。最后除菌过滤采用0.2...
1.mRNA/LNP的组成和结构 准确说来,载mRNA的脂质纳米粒(Lipid nanoparticle,LNP)除了含有带负电荷的mRNA外,另有四种成分:可电离的阳离子磷脂(ionizable lipids),中性辅助磷脂,胆固醇,聚乙二醇修饰的磷脂(PEGylated lipid)。 表五LNP各组分的比例 信息来源:Vaccines ...
制剂过程可以使用不同的方法。Reichmuth等人已经证明了通过流体混合步骤形成LNP的可能性。首先,准备干净的mRNA缓冲溶液和乙醇溶液,其中脂质被稀释。然后,通过混合,mRNA和脂质将形成所需的纳米颗粒。然后,通过切向流过滤(TFF)去除乙醇。包封的mRNA疫苗的最后一步工艺是除菌过滤,这是一个法规要求步骤。使用孔径约为0.2μm...
•高流速(10MV/min),低压差,有效缩短工艺时间; •高载量,高分辨率,高回收。 3. mRNA与正电荷材料复合(微流控包装LNP): PNI NanoAssemblr 平台解决方案。 4:LNP纯化/浓缩: SPTFF单向切向流技术平台 •无回流/循环管路 ; •流量比率控制 (FRC) ; ...
到目前为止,业界进行mRNA制备的主要工艺路线如图所示,主要包括:质粒制备与线性化 ->体外转录->加帽加性-> mRNA纯化->mRNA-LNP制备->LNP纯化->LNP除菌过滤->制剂灌装。本文主要讨论后段工艺,即mRNA-LNP制备、纯化及除菌过滤过程中需要考虑的工艺要素。
mRNA药物制备工艺有多个环节,其中包含四个关键步骤:环状质粒生产与线性化(linearization)、体外转录(In Vitro Tranion, IVT)与纯化、LNP(lipid nanoparticles)设计生产、制剂灌装等,每个步骤均存在不同的工艺难点。 质粒生产工艺流程 挑战1:质粒生产与线性化 ...