与普通的qPCR有所不同,MeRIP-qPCR是验证某个目标基因上的某个修饰位点(以一小段区域的形式,MeRIP法精确不到单碱基)的修饰水平。得到的结果往往是一个%(IP/Input)的数值,它体现的是该位点的修饰水平(目标基因发生该修饰的转录本占该基因总转录本的比例),而普通qPCR验证的是某个基因的表达水平(共表达了多少转录...
m6A绝对定量qPCR 简介 服务流程 N6-甲基腺嘌呤(m6A)是RNA中丰度最高的转录后修饰,在生物学过程中扮演重要角色。很多研究发现,各类RNA上单个m6A即可发挥重要功能。由于缺乏在精确位点鉴定m6A修饰的高灵敏度方法,使得m6A的功能研究很大程度上仍未得到探索。新研究发现,T3 DNA连接酶对m6A修饰有高度的敏感性。在此基础上...
m6A修饰RNA表达水平定量检测(MeRIP-qPCR)是将RNA免疫共沉淀与荧光定量PCR相结合的技术,通过特异性抗体富集total RNA中发生m6A甲基化修饰的RNA,借助特异性引物实现对m6A修饰的mRNA、lncRNA或circRNA进行定量的目的,可以应用于经MeRIP-seq发现的m6A修饰的基因(或已知的某个靶基因)在组间样本中m6A修饰水平的差异验证。 技...
MeRIP-qPCR 是m6A-IP-qPCR 的另一种说法。所以从名称上我们就能发现,m6A-IP-qPCR基本和常规的RIP-qPCR相似。当然在讨论RIP-qPCR之前,我们先来看看常规的RT-qPCR 是如何计算相对表达量的。 关于RT-qPCR的方法学论文很多,所以这里关于实验部分就不细讲了。计算基因的绝对定量需要加入外参基因,所以暂且我们先来看看相...
所谓m6A-IP-qPCR也叫MeRIP-qPCR,即利用m6A抗体在富集到带甲基化修饰的RNA后,下一步使用qPCR直接对富集到的RNA进行定量的一种技术。 这种技术可以做到对发生甲基化的RNA进行相对定量,是一种低成本的检测方法,仅需m6A抗体,A/G免疫磁珠,磁力架和qPCR仪及配套试剂盒即可开展这类实验。
创新方法将 MeRIP 和m6A-CLIP 的优点与最快的程序结合起来,特别推出:m6A RNA甲基化片段富集试剂盒(qPCR版)【简称:MeRIP试剂盒】。 使用m6A RNA甲基化片段富集试剂盒富集m6A RNA,通过采用A-1801-m6A抗体从10ug人类总RNA和500ng 阳性对照oligo中富集包含m6A 片段的RNA。Non-immune IgG作为阴性对照.对富集后的RNA进...
检测目标基因的m6A甲基化变化:MeRIP-qPCR 检测目标基因的mRNA水平:RT-qPCR 检测目标基因蛋白质水平:Western blot 检测细胞功能/表型变化 (3)靶向目标基因的甲基化/去甲基化实验,检测某区域m6A修饰是否真的影响目标基因的表达 目的基因m6A甲基化干扰细胞系的构建:荧光素酶活性分析实验(Luciferase activity assay)——构建...
图6:qPCR分析表明,冷富集m6A转录本与RNA丰度以及核糖体占有率之间存在潜在相关性。在Col-0和mta中,候选CBF和COR基因的相对mRNA丰度和多聚体负载的变化通过对照和低温条件下的倍数变化来分析。 关于易基因RNA m6A甲基化测序(MeRIP-seq)技术 易基因MeRIP-seq技术利用m6A特异性抗体富集发生m6A修饰的RNA片段(包括mRNA、...
m6A甲基化RNA免疫沉淀(MeRIP)是一种检测m6A修饰状态并在全转录组范围内定位m6A RNA修饰位置的方法。riboMeRIPTM m6A Transcriptome Profiling Kit 使用MeRIP方法进行m6A RNA修饰的鉴定和转录组分析。在MeRIP实验中,将RNA片段化后,使用针对m6A的单克隆抗体进行免疫沉淀。回收RNA后可进行qRT-PCR(MeRIP-qPCR)或RNA测序(MeR...