如果用数字来表示那就是input需要100ng,m6A在IP前需要1ug,IgG在IP前也需要1ug。 所以接下来我们就要详细讨论下m6A-IP-qPCR 是如何计算相对表达量的。 PART03 MeRIP-qPCR 是m6A-IP-qPCR 的另一种说法。所以从名称上我们就能发现,m6A-IP-qPCR基本和常规的RIP-qPCR相似。当然在讨论RIP-qPCR之前,我们先来看看常规...
所谓m6A-IP-qPCR也叫MeRIP-qPCR,即利用m6A抗体在富集到带甲基化修饰的RNA后,下一步使用qPCR直接对富集到的RNA进行定量的一种技术。 这种技术可以做到对发生甲基化的RNA进行相对定量,是一种低成本的检测方法,仅…
所谓m6A-IP-qPCR也叫MeRIP-qPCR,即利用m6A抗体在富集到带甲基化修饰的RNA后,下一步使用qPCR直接对富集到的RNA进行定量的一种技术。 这种技术可以做到对发生甲基化的RNA进行相对定量,是一种低成本的检测方法,仅需m6A抗体,A/G免疫磁珠,磁力架和qPCR仪及配套试剂盒即可开展这类实验。 第一步提取total RNA,作为可选...
通过qRT-PCR验证MdMTA可能通过影响干旱下木质素生物合成和H2O2清除相关基因表达来响应干旱。通过m6A-IP-qPCR验证MdMTA介导的基因表达变化是否与m6A甲基化相关。 检测干旱条件下GL-3和MdMTA RNAi植株mRNA稳定性,以研究MdMTA介导的m6A修饰对mRNA稳定性的影响。检测干旱条件下GL-3和MdMTA RNAi植株中转录本的翻译效率,以...
检测目标基因的m6A甲基化变化:MeRIP-qPCR 检测荧光素酶报告基因的mRNA表达水平:RT-qPCR 检测目标基因蛋白质表达水平:Western blot 检测细胞功能受到的影响:免疫荧光显微观察、功能标志物测定... ... (4)研究目标基因的m6A甲基化如何影响目标基因表达 检测m6A是否通过影响目标基因翻译而影响蛋白质水平:Polysome profiling...
锐博生物提供的MeRIP-Seq(Methylated RNA Immunoprecipitation Sequencing)利用单克隆抗体抓取存在m6A修饰的RNA片段,结合高通量测序,实现转录组学范围内的m6A peak检测与motif分析,覆盖从m6A-IP、建库测序分析及MeRIP-qPCR一站式服务。 锐博优势技术特色 1、平台完整: MeRIP实验—建库测序分析—MeRIP qPCR验证,真正一站式服...
当然做完IP我们也可以直接做qPCR,称为MeRIP-qPCR,大体流程如下 第一步,先对RNA进行特异性富集和打断。即在打断之前,我们需要搞清楚研究对象只是mRNA还是lncRNA。若只研究mRNA 可以先用oligodT磁珠进行富集后再进行打断。如果是lncRNA和mRNA都要研究,则需要先用试剂盒将total RNA的rRNA先去除干净,再进行打断。如果是...
ESCC 细胞中的免疫共沉淀 (co-IP) 实验证实 PEBP1 和 MTHFD2 相互结合(图 5D 和 E)。然而,正如 WB 和 qPCR 所示,MTHFD2 敲低并没有改变 PEBP1 的蛋白质或 mRNA 水平(图 5F 和 G)。这些发现表明,MTHFD2 可能通过与 PEB...
m6A-IP-qPCR分析显示野生或突变转录本中的相对m6A富集。 j. 翻译效率分析的简要工作流程。 k. NCED5、ABAR和AREB1的翻译效率。翻译效率表示为多体RNA中mRNA相对于总RNA的丰度比。数据表示为平均值±标准差(n=3)。星号表示显著差异(*P< 0.05,**P< 0.01,***P< 0.001;学生t检验) ...
MeRIP-qPCR:利用m6A抗体在富集到带甲基化修饰的RNA后,下一步使用qPCR直接对富集到的RNA进行定量的一种技术。建议结合基因表达RT-qPCR 、WB等验证手段一起进行试验结果验证。 9. m6A甲基化的研究思路? 典型的m6A研究的法则: 1)m6A测序前的预实验,检测RNA的m6A水平是否发生差异等; ...