siMETTL3/14对目标基因与与核糖体的结合造成影响,对内参基因GAPDH无影响。 研究m6A是否通过调节mRNA的稳定性和降解而影响目标基因蛋白水平研究m6A对目标基因mRNA水平的影响RT-qPCRRNA-seq METTL3/14干扰后,采用RT-PCR和RNA-seq检测目标基因的mRNA水平是否收到影响 研究m6A是否通过调控RNA的出核(nuclear export)而影响...
8. MeRIP-seq后续的实验验证? MeRIP-qPCR:利用m6A抗体在富集到带甲基化修饰的RNA后,下一步使用qPCR直接对富集到的RNA进行定量的一种技术。建议结合基因表达RT-qPCR 、WB等验证手段一起进行试验结果验证。 9. m6A甲基化的研究思路? 典型的m6A研究的法则: 1)m6A测序前的预实验,检测RNA的m6A水平是否发生差异等; ...
研究m6A是否通过调节mRNA的稳定性和降解而影响目标基因蛋白水平 研究m6A对目标基因mRNA水平的影响 RT-qPCR RNA-seq METTL3/14干扰后,采用RT-PCR和RNA-seq检测目标基因的mRNA水平是否收到影响 研究m6A是否通过调控RNA的出核(nuclear export)而影响目标基因蛋白水平 裂解细胞,超速离心分离细胞核与细胞质,然后分别进行RT-...
e–h. 在MTA沉默(RNAi MTA)或MTA过表达(OE-MTA)果实中NCED5、ABAR和AREB1的相对m6A富集(e)、基因表达(f)、mRNA稳定性(g)和翻译效率(h)变化。通过m6A-IP-qPCR和定量RT-PCR分别分析m6A的相对富集度和基因表达。在放线菌素D处理后的指定时间点提取总RNA,并进行定量RT-PCR分析mRNA稳定性。翻译效率表示为多...
选用超过 25 株经 TDE 编辑的 GhECA1 以及超过 30 株经 TME 编辑的 GhECA1 的 T0 代植物用于转录水平分析,通过 RT-qPCR 检测发现 dCas13(Rx)基因在这些转基因植物中转录情况良好,但不同编辑的单子叶植物间存在差异(图 3d)。鉴于传统评估 m6A 修饰方法存在缺乏单核苷酸分辨或定量能力不足,研究采用 SELECT ...
技术平台:MeRIP-seq(m6A-seq)、RNA-seq、定量RT-PCR、m6A-IP-qPCR、RIP等 研究摘要: 本研究通过MeRIP-seq等分析表明了m6A甲基化在草莓果实成熟过程中是显著变化。编码序列(CDS)区域中的m6A修饰表现出成熟特异性,并靶向稳定mRNA,而终止密码子周围和3′UTR区域内的m6A修饰通常与相关mRNA丰度呈负相关。研究人员CDS区...
所以这就是测序不需要IgG文库，而我们做m6A-IP-qPCR 需要IgG富集的原因。搞定了样本起始量和IgG的问题后，我们具体来看下步骤：第一步，先对RNA进行特异性富集和打断。即在打断之前，我们需要搞清楚研究对象只是mRNA还是lncRNA。若只研究mRNA 可以先用oligodT磁珠进行富集后再进行打断。如果是lncRNA和mRNA都要研究，...
对于m6A相关蛋白的检测,研究人员可以使用m6A抗体或特异性抗体对m6A相关蛋白进行免疫沉淀,然后通过RT-qPCR、RNA测序等方法检测RNA与蛋白的相互作用。RIP方法可以直接检测RNA与蛋白的结合情况,是研究RNA修饰的重要方法之一。 3. CLIP-Seq 4. 基因编辑技术 近年来,基因编辑技术如CRISPR-Cas9等已广泛应用于研究m6A相关蛋白...
目标基因m6A甲基化的验证:MeRIP-RT-PCR检测目标基因的mRNA表达水平:RT-qPCR检测目标基因蛋白质表达水平:Western blot (2)全局m6A甲基化干扰实验(非靶向),验证m6A甲基化书否真的影响目标基因表达和细胞功能 m6A甲基化干扰:m6A writers/erasers的突变/敲降/敲除/过表达、m6A甲基化抑制剂 ...
性价比更高:包含RNA纯化磁珠,方便IP后RNA回收,无需另购RNA纯化试剂盒 多篇文章发表:已有多篇应用本试剂盒的m6A文章发表,见文末列表 实验流程 图1:GenSeq® m6A MeRIP试剂盒实验流程 结果展示 图2. MeRIP-qPCR检测结果:Input%分析 图3. MeRIP-qPCR检测结果:Fold Enrichment分析 ...