研究人员利用RT-qPCR对从非肥胖(体重指数[BMI] < 30)或肥胖(BMI≥30)的人体BAT活检组织(小编注:BAT是来源于通过PET/CT而确定具有BAT的健康志愿者和手术患者,一共6男7女,包括腹膜后脂肪、深腹部脂肪、肾上腺周围深层脂肪和腹膜后深层脂肪)进行了分析。
目的基因m6A甲基化干扰细胞系的构建:荧光素酶活性分析实验(Luciferase activity assay)——构建含甲基化/未甲基化m6A位点的目标基因-荧光素酶表达质粒,转染细胞并表达。 检测目标基因的m6A甲基化变化:MeRIP-qPCR 检测荧光素酶报告基因的mRNA表达水平:RT-qPCR 检测目标基因蛋白质表达水平:Western blot 检测细胞功能受到的...
分别采用RT-qPCR和western blot分析4组RAW264.7细胞中NFATc1的mRNA和蛋白表达水平。 将YTHDF1或METTL14按不同分组分别或同时转染RAW264.7细胞,并制备用于进一步研究。TRAP染色和F-actin带染色检测4组破骨细胞分化情况;比例尺:200 μm。4组TRAP阳性破骨细胞数量、覆盖率及细胞核直方图。4组RAW264.7细胞中Ctsk、MMP9...
一、FTO可稳定LINK-A并与化疗耐药性相关 为了研究ESCC化疗耐药性背景下关键lncRNA的m6A修饰,该研究收集了34份接受新辅助化疗的ESCC患者的基线样本(17例化疗耐药和17例化疗敏感),通过RT-qPCR测定,化疗耐药样本中m6A去甲基酶FTO的mRNA表达水平显著高于化疗敏感样本(图1A)。先前建立的亲本和化疗耐药ESCC细胞系中FTO的蛋...
目标基因m6A甲基化的验证:MeRIP-RT-PCR 检测目标基因的mRNA表达水平:RT-qPCR 检测目标基因蛋白质表达水平:Western blot (2)全局m6A甲基化干扰实验(非靶向),验证m6A甲基化书否真的影响目标基因表达和细胞功能 m6A甲基化干扰:m6A writers/erasers的突变/敲降/敲除/过表达、m6A甲基化抑制剂 ...
RT-qPCR分析显示ZOL刺激或METTL14过表达后10个差异表达基因的表达水平。 NFATc1的基因组位点示意图。 在ZOL刺激或未刺激下,NFATc1转录本中meRIP-Seq的m6A peaks可视化。m6A peaks位于NFATc1的3‘UTR区。 SRAMP网站上NFATc1潜在的m6A甲基化位点。 根据潜在的m6A甲基化位点将NFATc1分为9个片段。
检测目标基因的mRNA表达水平:RT-qPCR 检测目标基因蛋白质表达水平:Western blot (2)全局m6A甲基化干扰实验(非靶向),验证m6A甲基化书否真的影响目标基因表达和细胞功能 m6A甲基化干扰:m6A writers/erasers的突变/敲降/敲除/过表达、m6A甲基化抑制剂 如环亮氨酸、m6A去甲基化抑制剂如FTO抑制剂FB23-2 ...
RT-qPCR分别检测ESCC患者和细胞系中基因和ncRNA表达水平,MeRIP-qPCR检测LINK-A甲基化; 通过生存分析、构建体外化疗耐药模型、异种移植实验等研究LINK-A在ESCC中的致癌作用; 通过质谱分析、RNA pull-down和蛋白质印迹分析,表明LINK-A通过促进MCM3与CDK1的相互作用促进MCM3磷酸化及其致癌作用; ...
RT-qPCR分析显示ZOL刺激或METTL14过表达后10个差异表达基因的表达水平。 NFATc1的基因组位点示意图。 在ZOL刺激或未刺激下,NFATc1转录本中meRIP-Seq的m6A peaks可视化。m6A peaks位于NFATc1的3‘UTR区。 SRAMP网站上NFATc1潜在的m6A甲基化位点。 根据潜在的m6A甲基化位点将NFATc1分为9个片段。
为了研究ESCC化疗耐药性背景下关键lncRNA的m6A修饰,该研究收集了34份接受新辅助化疗的ESCC患者的基线样本(17例化疗耐药和17例化疗敏感),通过RT-qPCR测定,化疗耐药样本中m6A去甲基酶FTO的mRNA表达水平显著高于化疗敏感样本(图1A)。先前建立的亲本和化疗耐药ESCC细胞系中FTO的蛋白水平结果显示,两种化疗耐药细胞系中FTO蛋白...