随着对RNA甲基化修饰,尤其是m6A修饰在细胞功能中作用的深入理解,MeRIP-seq技术已成为研究这一领域的重要工具。从常规MeRIP-seq到微量MeRIP-seq的优化,这一技术的应用范围不断扩大,为珍稀样本的研究提供了可能。此外,MeRIP-qPCR、SELECT法和OCPDIA法等后续验证技术的应用,进一步提高了我们对m6A修饰
m6A修饰RNA表达水平定量检测(MeRIP-qPCR)是将RNA免疫共沉淀与荧光定量PCR相结合的技术,通过特异性抗体富集total RNA中发生m6A甲基化修饰的RNA,借助特异性引物实现对m6A修饰的mRNA、lncRNA或circRNA进行定量的目的,可以应用于经MeRIP-seq发现的m6A修饰的基因(或已知的某个靶基因)在组间样本中m6A修饰水平的差异验证。
RIP-qPCR结果证实Hspa1a mRNA能直接与METTL3蛋白结合(图4f)。MeRIP-qPCR验证了在METTL3沉默的细胞系中Hspa1a mRNA的m6A修饰水平显著降低(图4g)。随后进行RNA稳定性实验以分析METTL3介导的m6A修饰对Hspa1a表达调控作用机制。METTL3沉默后,Hspa1a mRNA的衰减速度显著快于对照组(图4h)。这些结果表明METTL3增加了Hspa1a...
目的基因m6A甲基化干扰细胞系的构建:荧光素酶活性分析实验(Luciferase activity assay)——构建含甲基化/未甲基化m6A位点的目标基因-荧光素酶表达质粒,转染细胞并表达。 检测目标基因的m6A甲基化变化:MeRIP-qPCR 检测荧光素酶报告基因的mRNA表达水平:RT-qPCR 检测目标基因蛋白质表达水平:Western blot 检测细胞功能受到的...
检测目标基因的m6A甲基化变化:MeRIP-qPCR 检测荧光素酶报告基因的mRNA表达水平:RT-qPCR 检测目标基因蛋白质表达水平:Western blot 检测细胞功能受到的影响:免疫荧光显微观察、功能标志物测定... ... 用于验证目标基因上m6A甲基化功能的双荧光素酶报告系统
检测目标基因的m6A甲基化变化:MeRIP-qPCR 检测目标基因的mRNA水平:RT-qPCR 检测目标基因蛋白质水平:Western blot 检测细胞功能/表型变化 (3)靶向目标基因的甲基化/去甲基化实验,检测某区域m6A修饰是否真的影响目标基因的表达 目的基因m6A甲基化干扰细胞系的构建:荧光素酶活性分析实验(Luciferase activity assay)——构建...
检测目标基因的m6A甲基化变化:MeRIP-qPCR 检测目标基因的mRNA水平:RT-qPCR 检测目标基因蛋白质水平:Western blot 检测细胞功能/表型变化 FB23-2给药后,大脑损伤组神经功能缺陷评分显著变差 (3)靶向目标基因的甲基化/去甲基化实验,检测某区域m6A修饰是否真的影响目标基因的表达 ...
由于YTHDF1的m6A reader功能,通过m6A免疫沉淀测序(MeRIP-seq)以鉴定m6A修饰的转录本。通过筛选参与TNF信号通路的mRNA m6A peaks,鉴定出两个p65 mRNA终止密码子周围的m6A位点(图5B),并通过MeRIP-qPCR进行验证(图5C)。通过RNA免疫沉淀(RIP)测序和抗YTHDF1抗体的RIP-qPCR鉴定出YTHDF1和p65 mRNA之间的直接互作(图5D...
锐博生物提供的MeRIP-Seq(Methylated RNA Immunoprecipitation Sequencing)利用单克隆抗体抓取存在m6A修饰的RNA片段,结合高通量测序,实现转录组学范围内的m6A peak检测与motif分析,覆盖从m6A-IP、建库测序分析及MeRIP-qPCR一站式服务。 锐博优势技术特色 1、平台完整: MeRIP实验—建库测序分析—MeRIP qPCR验证,真正一站式服...
由于YTHDF1的m6A reader功能,通过m6A免疫沉淀测序(MeRIP-seq)以鉴定m6A修饰的转录本。通过筛选参与TNF信号通路的mRNA m6A peaks,鉴定出两个p65 mRNA终止密码子周围的m6A位点(图5B),并通过MeRIP-qPCR进行验证(图5C)。通过RNA免疫沉淀(RIP)测序和抗YTHDF1抗体的RIP-qPCR鉴定出YTHDF1和p65 mRNA之间的直接互作(图5D...