Co-IP和IP区别: Co-IP:研究的是体内自然状态下的蛋白质互相作用,不能显示蛋白质之间的相互作用是直接还是间接的。 IP:根据抗原和抗体的特异性结合,利用抗体将靶标蛋白分离或纯化,检测某一种蛋白的表达情况。 传统IP和Co-IP基本步骤: 1.添加合适的抗体。 2.抗体与目标蛋白结合。 3.添加Protein A/G使抗体-蛋...
区别一：Co-IP作用：Co-IP，证明两个蛋白在胞内有相互作用，但是这个作用可以是直接相互作用，也可以是形成复合物后的间接相互作用。区别二：pull-down作用：pull-down，胞外纯化蛋白后证明两个蛋白之间有相互作用，这个相互作用必然是直接相互作用。区别三：Co-IP，in vivo作用：Co-IP，in vivo，可以...
2. GST pull-down可检测到利用啮齿动物细胞从组织中获得的细胞匀浆等,而CO-IP主要是进行蛋白免疫染色实验,并且其灵敏度也更高。 3. CO-IP通常只能采用单个抗体,用于检测特定的 相互作用 ,而GST pull-down使用基础载体蛋白质的普遍性使其不局限于特定的相互作用关 系 4. GST pull-down技术虽然是一种较为简单,...
GST Pull-Down实验是验证体外蛋白互作的主要方式。通过体外表达亲和蛋白-GST，将亲和蛋白固化在谷胱甘肽亲和...
( Input部分检测的是未经过IP处理的样本,是一种阳性对照,显示实验组和对照组中样本的成分,同时也确保了实验操作无误。) 其次看IP部分,该实验采用的是IP:HA,表明是用HA标记的蛋白(ARF-WT-HA)作为诱饵蛋白,使用HA抗体(anti-HA)作为诱饵蛋白抗体进行IP实验,而靶标蛋白则是带Myc标签的蛋白(myc-Exportin-5)。IP...
主页> 问答中心> 蛋白分析FAQ汇总> Co-IP和GST-pull down有什么区别? 免疫共沉淀(Co-IP)实验是在非变性条件下进行的,可以最大限度地保持蛋白质之间相互作用的天然活性。因此,Co-IP可以很好地原位反映蛋白质的真实相互作用。然而,仅使用Co-IP,我们不能确定蛋白质相互作用是直接的还是间接的。通过靶蛋白抗体免疫共...
CO-IP可以分为在目的细胞中的内源性IP和在工具细胞系(一般为293T)的外源性CO-IP。而GST-Pull down可作为在原核生物中表达的蛋白,已经完全脱离了细胞环境,只有真正有相互作用的蛋白才能被拉下来。 免疫共沉淀(Co-IP)是利用抗原与抗体之间的专一性作用为基础,用于研究蛋白质与蛋白质之间相互作用的经典方法。利用...
蛋白参与的交互作用,都会用到一个共同的实验原理,叫免疫共沉淀(Immunoprecipitation),即用一个蛋白的特异性抗体去沉淀这个蛋白,与它存在结合的其他分子会被一起沉淀下来,接下来对沉淀物里的其他分子进行鉴定,核酸就用测序,蛋白就用质谱,就能分析得到与特定蛋白存在交互的其他分子。 理解了co-IP,ChIP和RIP是类似的原...
CoIP实验原理 CoIP,Co-Immunoprecipitation,即免疫共沉淀实验,它通过一种偶联有Protein A/G的琼脂糖微珠或磁珠(Protein A/G能够特异性结合免疫球蛋白),将诱饵蛋白的抗体固定,随后再通过该抗体固定诱饵蛋白,当与诱饵蛋白有相互作用的靶标蛋白与此固相复合物混合时就可被吸附而“沉淀”下来。