切断模板链与flowcell引物的连接,保留互补链 与Read1测序原理类似,加入不同的测序引物(Read2 sequencing primer),测得Read2的数据 Part 3: 值得思考的问题 Q1. 二代测序读长为什么是固定的 常见illumina测序长度为双端各150bp的Read,为什么是这样?结合 @星空Idealist 的回答,文库制备时就已经按照长度筛选过了一次...
3. 类似的,readprimer2结合到靠近P7’的read primer binding site 2开始对Reverse strand的测序。测序完成后即可得到Reverse read序列。 前面介绍的都是paired-end的测序,而single-end测序方式是只将index,sequencing primer binding site以及P7/P5添加到 fragamented DNA片段的一端,另一端直接连上P5/P7,将片段固定...
1. Flowcell上随机分布了两种不同的寡核苷酸序列，分别与P5互补（即P5’），与P7⼀致（即P7）。2. 待测sequence通过P5与folwcell上的P5’序列杂交互补，以待测sequence为模板进⾏互补链（即reverse strand）的延伸，互补链的两端为P5’和P7’。3. 接下来模板链被切断并洗下 Reverse strand的P7’与Flow...
我们先把连接在P5上面的链洗掉,就成了上图左边的情况,然后我们让read1的primer结合上去,边合成边测序,记住,这里一簇DNA有很多这样的链,所以你看到的荧光信号会很强,如果没有桥式PCR,你就不可能实现这样的效果。需要注意的是,我在这里把sample index也标出来了,为什么会有这个东西,因为实际上有时候一个flowcell的...
i5 sequence: ATAC-seq的Adaptor1 里没有barcode i7 sequence:有两种Adaptors，分别为Adaptor1 （50bp） 和Adaptor2 （53bp）。其中Adaptor1（5’ illumina Primer1 sequence （29bp）+ Tn5 Read1 sequence（14bp）（再延伸到ME里面7bp）3’），Adaptor2（5’ illumina Primer2 sequence（24bp）+...
i5 sequence: ATAC-seq的Adaptor1 里没有barcode，但我这里加上了 有两种Adaptors，分别为Adaptor1 （50bp） 和Adaptor2 （53bp）。其中Adaptor1（5’ illumina Primer1 sequence （29bp）+ Tn5 Read1 sequence（14bp）（再延伸到ME里面7bp）3’），Adaptor2（5’ illumina Primer2 sequence（24...
Day1_01_TS_Illumina_SBS二代测序简介-中国区武汉培训
1. 洗脱index2测序产物后,以Flowcell上的P5’为引物,Forward strand为模板进行桥式扩增,得到双链 2. NAOH使双链变性为单链,并洗去已经测序完成的Forward strand 3. 类似的,readprimer2结合到靠近P7’的read primer binding site 2开始对Reverse strand的测序。测序完成后即可得到Reverse read序列。
i5 sequence:ATAC-seq的Adaptor1 里没有barcode,但我这里加上了 1. 所以,ATAC-seq的这个Oligo designs (Adaptors)可以大概总结: 有两种Adaptors,分别为Adaptor1 (50bp) 和Adaptor2 (53bp)。 其中Adaptor1(5’ illumina Primer1 sequence (29bp)+ Tn5 Read1 sequence(14bp)(再延伸到ME里面7bp)3’),Adaptor...
1. 所以,ATAC-seq的这个Oligo designs (Adaptors)可以大概总结: 有两种Adaptors,分别为Adaptor1 (50bp) 和Adaptor2 (53bp)。 其中Adaptor1(5’ illumina Primer1 sequence (29bp)+ Tn5 Read1 sequence(14bp)(再延伸到ME里面7bp)3’),Adaptor2(5’ illumina Primer2 sequence(24bp)+ barcode sequence (8...