Cre-LoxP系统原理 当基因内存在loxP位点且有Cre重组酶存在时,Cre重组酶便会与loxP位点两端的反向重复序列区结合形成二聚体。此二聚体与其他loxP位点的二聚体结合,进而形成四聚体。随之,loxP位点之间的DNA序列被Cre重组酶切开,切口通过DNA连接酶重新连接。DNA重组结果主要取决于loxP位点的方向及位置。根据loxP
反转会使两个loxP位点或者Lox2272位点变成同向。第二步在Cre酶的作用下,剪切删除一个LoxP位点和一个Lox2272位点,进而实现基因的稳定表达。 图3.DIO序列策略原理 2. LSL序列策略 LSL序列策略是将LoxP和转录中止盒插入启动子和目的基因中间,构成转录“终止盒”(Lox-stop-Lox),这个“终止盒”能够终止基因的转录。在...
其原理是重组酶Cre能识别loxP位点(特定的DNA序列),并使loxP位点间的基因序列被重组或删除。受此启发,科学家在检测抗虫基因成功导入烟草细胞后,尝试用Cre/loxP重组酶系统删除转基因烟草细胞内的抗除草剂基因,其技术过程如下图所示(其中■表示启动子)。 (1)在基因工程中使用的载体除质粒外,还有 等;loxP是一种含34...
一般而言，当细胞基因组内存在两个LoxP位点时，Cre重组酶会诱导两个LoxP位点间的序列发生重组。重组的结果取决于两个LoxP位点的方向，主要有以下几种可能： 1、如果两个LoxP位点位于一条DNA链上，但方向相反，Cre重组酶能导致两个LoxP位点间的序列翻转；2、如果两个LoxP位点位于一条DNA链上，并且方向相同，Cre重组...
loxP 位点是一个 34 bp 的序列，由两个 13 bp 的反转和回文重复序列和 8 bp 的核心序列组成。Cre-loxP 主要用于基因敲除，但它也会根据 loxP 位点的取向和位置诱导两个 loxP 位点之间的 DNA 反转和易位[1]。2常用的 Cre-loxP 诱变系统 图 2. Cre-loxP 诱变系统的原理[1]。 ▐ Cre-ER (Tam) ...
C、Translocation(易位):两个loxP位点位于不同的DNA链或染色体上,Cre重组酶诱导两条DNA链发生交换或染色体易位。 Cre-loxP系统分类 1. LSL序列(Cre-on) 基于以上原理上,设计出了LSL序列(loxP-STOP-loxP),在没有Cre酶的情况下,由于STOP cassette...
当Cre重组酶表达量高到足以影响细胞生理学,或当Cre重组酶错误识别与loxP位点相似的基因组序列时,会发生Cre毒性,导致在没有loxP位点存在的情况下,也会造成纤维细胞、胃细胞和精子等组织中DNA的损伤。 大多数Cre工具鼠在杂合状态时所表达的Cre重组酶水平足以诱导重组的发生,考虑到转基因小鼠在培育至纯合状态时可能会发...
re-loxP 是一种位点特异的基因重组技术,被广泛应用于特异位点的基因敲除、基因插入、基因翻转和基因易位,在真核生物和原核生物中均有广泛应用。 Cre-loxP 的基本原理 Cre 蛋白是一种重组酶,是causes recombination的缩写,于1981 年从 P1 噬菌体中被发现,属于 λInt 酶超基因家族。Cre 重组酶基因编码区序列全长...
Loxp 位点是一段特定的 DNA 序列。当存在 Cre 酶时,它会结合到 loxp 位点上。Cre-loxp 系统可实现基因的敲除。也能用于基因的插入操作。该原理在细胞和生物体的基因编辑中广泛应用。可以精准地控制基因的表达和功能。Cre-loxp 能够介导染色体的重组。 从而导致基因组结构的改变。其作用具有高度的特异性。只会对...