引物设计完成之后,还需要对引物的特异性进行验证,例如oligo7、Primer-Blast、PCR产物琼脂糖凝胶电泳等,防止非特异性扩增对数据分析的干扰(做完qPCR后也可通过溶解曲线是否单一来判断)。 qPCR数据分析 在完成IP实验以及引物设计合成后,就可以进行qPCR实验啦。对每个样本(单个样本通常需要做3个技术重复)的Input、IP、IgG-...
引物设计完成之后,还需要对引物的特异性进行验证,例如oligo7、Primer-Blast、PCR产物琼脂糖凝胶电泳等,防止非特异性扩增对数据分析的干扰(做完qPCR后也可通过溶解曲线是否单一来判断)。 qPCR数据分析 在完成IP实验以及引物设计合成后,就可以进行qPCR实验啦。对每个样本(单个样本通常需要做3个技术重复)的Input、IP、IgG-...
因为如果你设计太长了,在你做ChIP的时候如果超声把DNA打的太短,你就验证不出来了。所以我们一般建议大家做qpcr验证的时候设计产物在100-150bp左右。 然后等待结果: 随后引物就设计出来了,我们一般建议大家,首先用3条引物: 引物设计之后之后,我们还要用引物...
📏 引物长度建议20-23bp,退火温度相近,GC含量约50%。 🚫 避免非特异性扩增,可使用Primer-Blast等软件验证。 📐 产物长度一般不超过150bp,以适应ChIP实验特点。3️⃣ 引物特异性检验 🧪 在ChIP样品上运行qPCR预实验,验证引物的效率和特异性。 📖 通过琼脂糖凝胶电泳检查引物特异性,确保IgG对照组条带微...
无论您是通过ChIP-qPCR来检测ChIP实验是否成功,为后续的建库和测序做准备,还是要通过qPCR的方式来检测蛋白与目标区域DNA的结合,正确的设计ChIP-qPCR引物会节省大量的时间和精力。 很多刚开始接触ChIP实验的同学和老师们常常对如何设计ChIP-qPCR引物感到有些迷茫,这里就让小编来一步步给您演示吧: ) 01 如果您手里有相...
在进行ChIP-qPCR实验时,对照实验的设计至关重要,它能帮助我们验证结果的准确性和特异性。以下是三种主要的对照类型,它们在实验中扮演着不可或缺的角色。 引物对照 🧬 引物对照是针对那些不被特定蛋白结合的区域设计的引物。通过比较这些区域与目标区域的PCR结果,我们可以评估实验的准确性和可靠性。引物对照的存在,确...
在设计好引物后，进行qPCR实验。实验中需对Input、IP和IgG分别进行，使用2-△△CT法进行数据分析，计算富集倍率或使用Percent Input法比较不同样本的富集差异。富集倍率大于2一般被视为富集，但实际应用中，可能需要结合其他验证技术来确认。为了保证结果的可靠性，通常建议做3个生物学重复。总的来说，ChI...
无论您是通过ChIP-qPCR来检测ChIP实验是否成功,为后续的建库和测序做准备,还是要通过qPCR的方式来检测蛋白与目标区域DNA的结合,正确的设计ChIP-qPCR引物会节省大量的时间和精力。很多刚开始接触ChIP实验的同学和老师们常常对如何设计ChIP-qPCR引物感到有些迷茫,这里就让小编来一步步给您演示吧: ...
无论您是通过ChIP-qPCR来检测ChIP实验是否成功,为后续的建库和测序做准备,还是要通过qPCR的方式来检测蛋白与目标区域DNA的结合,正确的设计ChIP-qPCR引物会节省大量的时间和精力。 很多刚开始接触ChIP实验的同学和老师们常常对如何设计ChIP-qPCR引物感到有些迷茫,这里就让小编来一步步给您演示吧: ) ...
一般来说,ChIP完成后可以通过测序(ChIP-Seq)、芯片(ChIP-on-chip)或者qPCR(ChIP-qPCR)进行检测,当你不知道靶基因是什么的时候可以用芯片和来筛选;如果你已经有备选的靶基因了,则可以通过基因中蛋白结合靶点的特异性引物来检测。 在漂亮的westernblot条带,为什么都是别人家的?一文中,我们介绍了一个抗体的数据库Ci...