1)对于荧光染料的选择,建议如果流式细胞仪带有 488 nm 和 633 nm 两个或以上激光管,首先考虑用 APC 或 YF647 标记 Annexin V,因为它和 PI 通道几乎不用考虑光重叠问题,可以减少调节补偿的烦恼,如果只有 488 nm 激光管则可选择YF488/FITC 标记的 Annexin V。 2)再次需要考虑细胞是否自带荧光,因为感染病毒或...
细胞凋亡检测实验步骤——流式检测 噗啦噗啦实验室 1.0万 0 flowjo对PI/Annexin V-FITC检测细胞凋亡的流式细胞术结果进行分析 Jingle进哥 4.2万 13 PI/Annexin V-FITC检测细胞凋亡之原理及注意事项 Jingle进哥 4180 0 医学生必备|细胞凋亡检测实验,PI染色,Hoechst染色,细胞增殖 酸菜教科研 7234 2 流式...
一、试剂与仪器 孵育缓冲液:10 mmol/L HEPES/NaOH,pH7.4,140 mmol/L NaCl,5 mmol/L CaCl2。 标记液:将FITC- Annexin V(宝灵曼公司产品)和PI加入到孵育缓冲液中,终浓度均为1 ug/ml。 流式细胞仪。 二、实验步骤 细胞收集:悬浮细胞直接收集到10 ml的离心管中,每样本细胞数为(1~5)×106/mL 500~1 00...
实验的解决方法：先低速离心，吸取细胞培养板中的液体，留少许液体，加入适量PI和Annexin-V染色10min后，将漂浮细胞吸至离心管中，离心洗涤两次，用PBS漂洗贴壁细胞两次，加胰酶消化后将细胞悬液移至另一离心管中，离心洗涤，再与漂浮细胞合并后上流式细胞仪检测。应用该法可降低晚期凋亡和坏死比例，增加早期凋亡细胞...
Annexin-V染色原理 凋亡早期，细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸（PS）从胞质转至胞外。Annexin-V（模联蛋白-V）。是一种磷脂结合蛋白，与PS有强亲和力。操作步骤（贴壁细胞为例）1、对照管的设置 1）空白管：诱导凋亡的细胞不加染料，用来调节电压；2）单染管：分别需要只加PI和荧光标记的Annexin V两个单染管，用来...
6. 孵育结束后加入400 µL 1×Annexin V Binding Buffer，轻柔混匀后置于冰上。注意：染色后尽可能在30 min内通过流式细胞仪进行检测。使用491 nm和535 nm激发，517 nm（FITC通道）和617 nm（PE或PI通道）附近测量荧光。B. 荧光显微镜分析 1. 对于悬浮细胞：(1）按照步骤A.1到步骤A.6的流式细胞分析步骤...
其中根据Annexin V染色分为左右两部分,右侧(Q2/3)为Annexin V染色阳性;根据PI染色分为上下两部分,上方(Q1/2)为PI染色阳性。一般认为Annexin V单染的细胞是凋亡早期的细胞,PI单染的细胞是已经死亡的细胞,而双染是凋亡晚期的。 左上象限Q1:(Annexin V-FITC)-/PI+,此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期...
接下来，你可以进行Annexin V和PI的染色，并利用流式细胞仪进行分析。通过这种方法，你可以准确地检测细胞凋亡的过程和阶段。，并弃去上清液。对于贴壁细胞，应使用不含EDTA的胰酶进行消化，且消化时间不宜过长，以防引起假阳性。为避免细胞黏连成团，影响后续检测，可在胰酶消化后将细胞保存在含2%BSA的PBS中，以...
1.把将被染色分析的细胞用冷PBS洗涤二次并在恰当的染色缓冲液(binding buffer)中以1 x 106 细胞/mL的浓度重悬。(染色缓冲液,binding buffer,中必须含有钙离子) 2.吸取100ul的细胞(1 x 105)至试管中。(必须在室温下进行) 3.加入适量的荧光标记的annexin V试剂和PI。(必须在室温下进行) ...
2、细胞消化下来后，同理悬浮细胞的操作步骤。▶ 上机检测 染色孵育后，立即进行流式细胞仪检测或荧光显微镜检测。Annexin VPI流式结果图（仅做参考）图：流式细胞仪凋亡检测结果图 ✔ 左上象限(Annexin V-/PI+)：为细胞碎片、机械损伤细胞或其它死细胞；Annexin V-/PI+象限中细胞数越多，实验结果可信度就越...