因此Annexin V是检测细胞早期凋亡的灵敏指标。 由于晚期凋亡和其他原因死亡的细胞,膜的通透性会增加,因此Annexin V一般不单独使用,往往会结合死活染料帮助进一步区分,其中最常用为核酸染料PI,7-AAD等,胞内染色用的如BD品牌的FVS系列死活染料也可以用,只是出于价格问题,成套试剂盒一般不会选用而已。 二、试剂荧光搭配的...
收集细胞时将培养液吸至离心管内，PBS洗涤细胞一次，用不含EDTA的胰酶消化细胞，并收集于离心管中（悬浮细胞可直接离心收集）；注：用胰蛋白酶消化然后使细胞在最佳细胞培养条件和培养基中恢复约30分钟，然后再染色。胰蛋白酶消化会暂时破坏质膜，允许Annexin V结合磷脂酰丝氨酸在细胞膜的细胞质表面上，从而导致假阳性...
左图：SF9细胞（SNL-170）高密度培养24h后通过Annexin V-FITC染色检测，采用荧光显微镜观察（白光+FITC荧光+PI荧光三色合成图片），无荧光为正常细胞，FITC荧光（绿色）为凋亡早期细胞，FITC荧光（绿色）+PI荧光（红色）为凋亡后期或死细胞。右图：Jurkat 细胞用 5μM 喜树碱处理4h后通过Annexin V-FITC染色检测，采...
1，细胞状态不好;2，细胞收集后存放的时间太长，没有及时染色;3，细胞表面原有的PS相对较多，应选用低浓度的AnnexinV标记;4，PBMC表面往往有血小板黏附在细胞表面，造成Annexin V阳性率偏高;5，过分吹打、震荡或胰酶消化等，可能使PS暴露出来。实验时处理组凋亡比例低的原因 1，凋亡刺激得不够;2，细胞本身生长状态...
Annexin V/PI双染色法的缺点 1、制备贴壁细胞样品时，容易因消化和吹打造成细胞额外损伤，从而夸大了实验结果，增加了数据变异度。2、凋亡细胞的本底荧光或非特异染色的特性会增强，导致荧光飘移，导致定量不准。实验交付内容 1、所有实验的原始数据（包括实验过程、实验试剂与设备等）；2、检测报告与结果分析（流式...
尽快使用流式细胞仪分析染色的细胞。 用 Annexin V 与生物素-X 偶联试剂标记的细胞需要使用二级检测试剂,例如荧光团标记的链霉抗生物素蛋白。 细胞混合物应分成至少两组:仅具有低水平荧光的活细胞和显示出明显更高荧光强度的凋亡细胞。 如果使用死...
细胞凋亡检测实验(Annexin V/PI双染色法) 细胞凋亡检测可以:(1)用于肿瘤细胞和组织在内的不同种类病理标本研究;(2)应用于临床诊疗,新药研制、生物制品开发、肿瘤放化疗、以及从促凋亡角度探索肿瘤的基因治疗;(3)对相关疾病的早期发现、放化疗的疗效评价具有举足轻重的地位。
作为一种Ca2+依赖性的磷脂酰丝氨酸结合蛋白,Annexin V 可以选择性地结合凋亡细胞表面的磷脂酰丝氨酸,并通过荧光染色等方式对凋亡细胞进行定量和分析。如果您正在进行细胞凋亡、肿瘤、心血管或神经系统等相关研究,Annexin V 将是您的理想选择。 Annexin V特点及应用范围 染色图片展示:图示: Costar黑壁/透明底96孔板中...
液氮保存的组织块,可以将组织标本进行切片,然后做原位染色,观察组织细胞的凋亡。 2) Annexin V也可以用在植物和细菌中检测凋亡,具体实验步骤可参考相关文献。 3)如果样品来源于血液,必须去除血液中的血小板,因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,干扰实验结果。 4)操作中务必动作轻柔,离心后确认管底是否有细胞,经常...