1)对于荧光染料的选择,建议如果流式细胞仪带有 488 nm 和 633 nm 两个或以上激光管,首先考虑用 APC 或 YF647 标记 Annexin V,因为它和 PI 通道几乎不用考虑光重叠问题,可以减少调节补偿的烦恼,如果只有 488 nm 激光管则可选择YF488/FITC 标记的 Annexin V。 2)再次需要考虑细胞是否自带荧光,因为感染病毒或...
Annexin V作为一种Ca2+依赖的磷脂结合蛋白,与PS有高度亲和力,可以与暴露在膜外侧的PS结合。因此Annexin V是检测细胞早期凋亡的灵敏指标。 由于晚期凋亡和其他原因死亡的细胞,膜的通透性会增加,因此Annexin V一般不单独使用,往往会结合死活染料帮助进一步区分,其中最常用为核酸染料PI,7-AAD等,胞内染色用的如BD品牌的FV...
🌈 通常,Annexin V被标记上荧光染料FITC,而碘化丙啶(PI)则用于区分凋亡和坏死细胞。PI的膜通透性较差,因此只能标记坏死的细胞。📊 在流式细胞仪的检测结果中,Annexin V-FITC(+)和PI(-)的细胞为凋亡细胞,而Annexin V-FITC(+)和PI(+)的细胞则为坏死细胞。🔬 通过这种染色方法,科学家们能够精确地监测和...
④用100 μl 1×Annexin V Binding Buffer重悬细胞,调整细胞密度,加入Annexin V抗体,室温避光15 min; ⑤用1×Annexin V Binding Buffer洗涤一次; ⑥按常规步骤,进行固定破膜+胞内染色+重悬上机等后续步骤。 四、实验注意事项: 1. 保证细胞活性:...
Annexin V是一种检测细胞凋亡的试剂,在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧,细胞发生凋亡早期,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V作为一种磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,它通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V是检测细胞早期凋亡的灵敏...
A以Annexin V-FITC/PI双染为例，凋亡前期的细胞只带FITC荧光，凋亡后期及坏死细胞除FITC荧光外还会带PI荧光，从流式和荧光显微镜结果来看的话见下图示例：左图：SF9细胞（SNL-170）高密度培养24h后通过Annexin V-FITC染色检测，采用荧光显微镜观察（白光+FITC荧光+PI荧光三色合成图片），无荧光为正常细胞，FITC荧光...
Annexin-V染色原理 凋亡早期，细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸（PS）从胞质转至胞外。Annexin-V（模联蛋白-V）。是一种磷脂结合蛋白，与PS有强亲和力。操作步骤（贴壁细胞为例）1、对照管的设置 1）空白管：诱导凋亡的细胞不加染料，用来调节电压；2）单染管：分别需要只加PI和荧光标记的Annexin V两个单染管，用来...
Annexin V/PI双染色法的缺点 1、制备贴壁细胞样品时，容易因消化和吹打造成细胞额外损伤，从而夸大了实验结果，增加了数据变异度。2、凋亡细胞的本底荧光或非特异染色的特性会增强，导致荧光飘移，导致定量不准。实验交付内容 1、所有实验的原始数据（包括实验过程、实验试剂与设备等）；2、检测报告与结果分析（流式...
A以Annexin V-FITC/PI双染为例,凋亡前期的细胞只带FITC荧光,凋亡后期及坏死细胞除FITC荧光外还会带PI荧光,从流式和荧光显微镜结果来看的话见下图示例: 左图:SF9细胞(SNL-170)高密度培养24h后通过Annexin V-FITC染色检测,采用荧光显微镜观察(白光+FITC荧光+PI荧光三色合成图片),无荧光为正常细胞,FITC荧光(绿色)为...