实验的解决方法：先低速离心，吸取细胞培养板中的液体，留少许液体，加入适量PI和Annexin-V染色10min后，将漂浮细胞吸至离心管中，离心洗涤两次，用PBS漂洗贴壁细胞两次，加胰酶消化后将细胞悬液移至另一离心管中，离心洗涤，再与漂浮细胞合并后上流式细胞仪检测。应用该法可降低晚期凋亡和坏死比例，增加早期凋亡细胞...
PI/Annexin V-FITC检测细胞凋亡之原理及注意事项 Jingle进哥 4180 0 医学生必备|细胞凋亡检测实验,PI染色,Hoechst染色,细胞增殖 酸菜教科研 7234 2 流式细胞凋亡检测试验 舍为斯生物 4742 0 活死细胞双染步骤 安静基础科研实验外包 5165 0 TUNEL染色、PI染色、细胞增殖、细胞迁移,细胞凋亡检测实验 酸菜教科研...
1、Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。(三) 获得含重组表达质粒的表达菌种 1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α...
Annexin V单染组：将细胞置于55℃水浴中处理10分钟，或加入凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，随后加入5μl Annexin V-FITC。PI单染组：取一半细胞加入4%多聚甲醛（使细胞死亡），离心后用PBS洗涤，再与正常活细胞混合，并加入5μl PI。Annexin V和PI双染组：同样进行55℃水浴处理或加入凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，之后分别...
Annexin V-FITC溶液 碘化丙锭(PI)溶液 实验步骤 1.细胞收集:悬浮细胞直接收集到10ml的离心管中,500~1000r/min离心5min,弃去培养液。 2.用预冷,4℃无菌的PBS充分洗涤细胞两次,用250μ结合缓冲液重新悬浮细胞,调节其浓度为1×106/ml。 3.取100μl的细胞悬液于5ml流式管中,加入5μl Annexin V-FITC和10μ...
3、实验步骤 一、试剂与仪器 1. 孵育缓冲液:10 mmol/L HEPES/NaOH,pH7.4,140 mmol/L NaCl,5 mmol/L CaCl2。 2. 标记液:将FITC- Annexin V(宝灵曼公司产品)和PI加入到孵育缓冲液中,终浓度均为1 ug/ml。 3. 流式细胞仪。 二、实验步骤 1. 细胞收集:悬浮细胞直接收集到10 ml的离心管中,每样本细胞...
加入5μL Annexin V-FITC,轻轻吹打混匀,加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许,可以在检测前5分钟加入PI); 5 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。 四、注意事项1Annexin V-FITC与PI量微,请在使用前低速离心将盖内壁上的液体甩...
5、随即进行流式细胞仪检测，Annexin V-FITC为绿色荧光，PI为红色荧光。▶ 贴壁细胞收集染色 1、把细胞培养液吸出至一合适离心管内，PBS洗涤贴壁细胞一次，用胰酶细胞消化液(最好不用含有EDTA)消化细胞。2、细胞消化下来后，同理悬浮细胞的操作步骤。▶ 上机检测 染色孵育后，立即进行流式细胞仪检测或荧光显微镜...
1)对于荧光染料的选择,建议如果流式细胞仪带有 488 nm 和 633 nm 两个或以上激光管,首先考虑用 APC 或 YF647 标记 Annexin V,因为它和 PI 通道几乎不用考虑光重叠问题,可以减少调节补偿的烦恼,如果只有 488 nm 激光管则可选择YF488/FITC 标记的 Annexin V。
图1 Annexin V/PI检测原理。实验流程：（1）收集细胞：在进行完细胞凋亡刺激后，用预冷的PBS洗涤细胞2次，4℃离心5min，（贴壁细胞使用不含EDTA的胰酶消化）；（2）重悬细胞：取1～5×105个重悬的细胞，离心弃掉PBS，加入Annexin V-FITC结合液轻轻重悬；（3）染色：加入Annexin V-FITC和PI Staining Solution，...